PCR le PCR ea Nako ea 'Nete: Liphapang ho Liphetho, le Likopo

Phapang e ka sehloohong pakeng tsa PCR le Real-Time PCR (qPCR) e boemong ba ho lemoha: PCR ea setso ke mokhoa oa boleng moo liphello li hlahlojoang qetellong ea karabelo (ho fumanoa ha ntlha ea ho qetela) ka gel electrophoresis, ha PCR ea Nako ea 'Nete e le mokhoa oa ho lekola kholo ea DNA ha e ntse e etsahala ka dae ea fluorescent. Ka lebaka leo, mochini oa PCR bakeng sa lits'ebetso tsa nako ea nnete o fana ka maikutlo a holimo le liphetho tse potlakileng, leha hangata o kenyelletsa litšenyehelo tse phahameng tsa lisebelisoa le reagent.

Ho khetha mahlale a nepahetseng ho ipapisitse le litlhoko tsa hau tse ikhethileng, ho rarahana ha lisampole tsa hau, le hore na sepheo sa hau ke boitsebahatso bo bonolo kapa palo e nepahetseng. Tataiso ena e fana ka karohano e felletseng ea litheknoloji tsena tse peli ho u thusa ho tseba hore na ke sistimi efe e lumellanang hantle le sepheo sa laboratori ea bongaka kapa lipatlisiso.

PCR ke Eng?

PCR, kapa Polymerase Chain Reaction, ke mokhoa oa mantlha oa baeloji ea limolek'hule o sebelisetsoang ho holisa karolo e itseng ea DNA ka lipotoloho tse pheta-phetoang tsa denaturation, annealing, le elongation, e fana ka sephetho sa 'e kapa che' sa boleng mabapi le boteng ba tatellano ea sepheo.

PCR ea setso hangata e bitsoa PCR ea ho qetela hobane ho lemoha sehlahisoa se holisitsoeng ho etsahala feela ka mor'a hore ts'ebetso eohle ea ho palama baesekele e futhumetseng e felile. Ts'ebetso ena e kenyelletsa mochini oa PCR o laolang ka nepo liphetoho tsa mocheso ho thusa ho ikatisa ha enzymatic ea DNA. Ka ho sebelisa li-primers tse tobileng tse lehlakoreng la sebaka seo ho shebiloeng ho sona, sistimi e ka fetola kopi e le 'ngoe ea tatellano ea DNA hore e be likopi tse limilione tse likete ka mor'a lihora tse seng kae. Khōlo ena e matla e etsa hore ho khonehe ho lemoha le metsotsoana e seng mekae feela ea liphatsa tsa lefutso sampuling, ha feela tatellano e reriloeng e tsejoa.

Ts'ebetso ea ts'ebetso ea PCR ea setso hangata e hloka mohato oa bobeli bakeng sa pono. Hang ha mochine oa PCR o qetile li-cycle tse hlophisitsoeng, DNA e hlahisoang (sehlahisoa se hōlisitsoeng) e tlameha ho kenngoa holim'a gel ea agarose bakeng sa electrophoresis. Mokhoa ona oa karohano o lumella bafuputsi ho netefatsa boholo ba likhechana tsa DNA le ho netefatsa hore sepheo se nepahetseng se ile sa holisoa. Hobane mokhoa ona ha o fane ka tlhahisoleseding mabapi le palo ea pele ea DNA sampuling, e sebelisoa haholo-holo bakeng sa lits'ebetso moo palo e sa hlokahaleng, joalo ka genotyping ea motheo kapa ho hlahloba boteng ba pathogen e itseng.

Theknoloji, mochine o tloaelehileng oa PCR e ntse e le ntho e ka sehloohong lilaboratoring ka lebaka la ho tiea le ho ba bonolo. E na le sebaka sa mocheso se nang le masoba moo ho kenngoa li-tubes tse tšoereng motsoako oa reaction. Ho tšepahala ha litsamaiso tsena ho bohlokoa bakeng sa lits'ebetso tsa indasteri le tsa bongaka moo ho holisoa ha DNA ka bongata e leng tlhokahalo ea letsatsi le letsatsi. Ho utloisisa haholoanyane ka litlhaloso tsa tekheniki tsa lisebelisoa tsena, o ka hlahloba lintlha tse qaqileng ho hore na mochini oa PCR o bitsa bokae le hore na o sebetsa joang.

PCR ea Nako ea 'Nete ke Eng?

Real-Time PCR, e tsejoang hape e le quantitative PCR (qPCR), ke mofuta o tsoetseng pele oa polymerase chain reaction e hlokomelang ho holisoa ha molek'hule ea DNA e lebisitsoeng nakong ea PCR (ke hore, ka nako ea nnete), eseng qetellong ea eona, e sebelisa matšoao a fluorescent ho lekanya palo ea DNA e teng.

Ho fapana le mekhoa ea setso, PCR ea Nako ea 'Nete e kopanya mekhahlelo ea ho holisa le ho lemoha hore e be mohato o le mong. Ha mochini oa PCR o ntse o potoloha mocheso, lidae tsa fluorescent kapa li-probes tse ikhethileng ka har'a motsoako oa karabelo li tlama ho DNA. Mochine oa mahlo oa mochine o lekanya matla a fluorescence, a eketsehang ka ho lekana le DNA e hōlisitsoeng. Sena se lumella ho bokelloa ha lintlha nakong ea kholo e kholo ea karabelo, ho fana ka tekanyo e nepahetseng haholo ea mahloriso a qalang a template ea DNA ho feta tlhahlobo ea ntlha ea ho qetela.

Ho nepahala ha nako ea nnete mochini oa PCR oa ke o mong oa melemo ea ona ea bohlokoahali. Hobane data e hapiloe ka dijithale, ha ho na tlhoko ea ts'ebetso ea post-PCR joalo ka gel electrophoresis. Sena ha se boloke nako ea bohlokoa ka laboratoring feela empa hape se fokotsa kotsi ea tšilafalo ea laboratori, kaha li-tubes tsa karabelo li lula li tiisitsoe ts'ebetsong eohle. Liphetho li bonts'oa joalo ka lekhalo la matlafatso skrineng sa komporo, moo 'Cycle Threshold' (Ct value) e bonts'ang ntlha eo fluorescence e fetang lerata la bokamorao. Theko e tlase ea Ct e bolela boemo bo holimo ba DNA e lebisitsoeng ho sampole ea mantlha.

Boemong ba tlhahlobo ea sejoale-joale, tlhoko ea lisebelisoa tse nang le kutloisiso e phahameng e entse hore palo e be ngata PCR e fana ka maemo a khauta a ho bona bongata ba vaerase, joalo ka tlhahlobo ea COVID-19 kapa tlhahlobo ea HIV. Bokhoni ba ho khetholla lipakeng tsa liphapang tse nyane haholo maemong a polelo ea liphatsa tsa lefutso bo etsa hore e be bohlokoa haholo bakeng sa lipatlisiso tsa mofetše le taolo ea mafu a tšoaetsanoang. Bakeng sa lilaboratori tse batlang ho ntlafatsa, ho bohlokoa ho khetha o sebetsang hantle haholo mochini oa PCR bakeng sa ho netefatsa hore datha e hlahisoa hape le ho nepahala ha bongaka litlhahlobong tse fapaneng tsa limolek'hule.

PCR vs Real-Nako PCR: Liphapang tsa Bohlokoa

Phapang e ka sehloohong pakeng tsa PCR le Real-Time PCR e kenyelletsa nako ea ho bokella lintlha, tlhokahalo ea ho sebetsa ka morao, le boemo ba kutloisiso; ha PCR ea setso e le ea boleng 'me e hloka gel electrophoresis bakeng sa pono, Real-Time PCR e ngata, e potlakile, ebile e na le maikutlo a mangata haholo ka lebaka la mokhoa oa eona o kopantsoeng oa ho lemoha optical.

Ho utloisisa hamolemo hore na mahlale ana a mabeli a bokellana joang, ho molemo ho sheba litekanyo tse khethehileng tsa tekheniki tse hlalosang ts'ebetso ea tsona. Leha bobeli ba bona ba sebelisa melao-motheo e tšoanang ea ho ikatisa ha DNA, hardware le k'hemistri tse kentsoeng mochining oa PCR oa nako ea nnete li rarahane haholo.

E 'ngoe ea liphapang tsa bohlokoa ka ho fetisisa ke tharollo ea data. Traditional PCR e na le mefuta e fokolang ea matla 'me hangata e nkoa e le 'sesebelisoa sa 'semi-quantitative'' ka ho fetisisa, kaha e lekanya feela karolo ea ho qetela ea sehlabeng sa karabelo. Ka lehlakoreng le leng, oa nako ea 'nete mochini oa PCR o lekola karolo ea exponential, moo karabelo e sebetsang hantle haholo le e bolelang esale pele ea lintho tse qalang. Sena se etsa hore PCR ea Nako ea 'Nete e be khetho e ratoang bakeng sa litlhahlobo tse hlokang ho nepahala ho holimo, joalo ka profil ea mofuta oa mofuta kapa ho tseba liphetoho tse sa tloaelehang.

Ho feta moo, ts'ebetso ea ts'ebetso ea ts'ebetso ea Real-Time PCR e ke ke ea fetisoa. Ka ho felisa mosebetsi oa matsoho o amanang le ho lokisa le ho tsamaisa li-gel tsa agarose, lilaboratori li ka eketsa tlhahiso ea tsona ea letsatsi le letsatsi. Sena se bohlokoa haholo bakeng sa lilaboratori tsa khoebo tsa B2B kapa lipetlele tse sebetsanang le lisampole tse makholo letsatsi le letsatsi. Ha ho hlahlojoa the mefuta e fapaneng ea mechini ea PCR , basebelisi ba lokela ho nahana hore le hoja matsete a pele bakeng sa qPCR a phahame, ho boloka chelete ea basebetsi le likotsi tse fokotsehileng tsa tšilafalo hangata li lokafatsa litšenyehelo tsa ts'ebetso e phahameng. Ho feta moo, bakeng sa ho kenella ka botebo ka har'a likarolo tse ikhethileng tse tsamaisang litšenyehelo tsena, u ka bala ka tsona Theko ea mochini oa PCR le ts'ebetso.

PCR vs PCR ea Nako ea 'Nete: Nako ea ho Sebelisa Mokhoa o Mong le o Mong

Ho khetha lipakeng tsa PCR le PCR ea Nako ea 'Nete ho ipapisitse le hore na morero oa hau o hloka tlhahlobo e bonolo ea boteng ba DNA kapa palo e nepahetseng; PCR ea setso e loketse ho etsa cloning ea mantlha le genotyping, athe PCR ea Nako ea 'Nete e bohlokoa bakeng sa tlhahlobo ea bongata ba vaerase le tlhahlobo ea polelo ea lefutso.

Bakeng sa mesebetsi e mengata e tloaelehileng ea laboratori, kutloisiso e phahameng ea nako ea sebele mochine oa PCR oa e ka 'na ea se ke ea hlokahala. Lits'ebetsong tse joalo ka mokhoa oa motheo oa ho kopanya limolek'hule kapa ho netefatsa katleho ea ho ntšoa ha DNA, PCR ea setso e fana ka tharollo e theko e tlaase le e tšepahalang. E boetse e sebelisoa haholo thutong le saenseng ea forensic moo sepheo sa mantlha e leng ho netefatsa boholo ba sekhechana sa DNA ho fapana le ho fumana hantle hore na ke likopi tse kae tse neng li le sampoleng ea mantlha.

Ka lehlakoreng le leng, tlhahlobo ea bongaka le lipatlisiso tse shebaneng le 'hore na' sepheo se teng li tlameha ho sebelisa PCR ea Nako ea 'Nete. Lefapheng la bongaka, ho khona ho lekanya tekanyo ea kokoana-hloko maling a mokuli ke habohlokoa bakeng sa ho lekanyetsa ho teba ha tšoaetso kapa ho atleha ha phekolo. Ho feta moo, lebelo le phahameng la Real-Time PCR le etsa hore e be khetho e ratoang bakeng sa libaka tse sa tsotelleng nako, joalo ka litsi tsa tlhahlobo ea maemo a tšohanyetso kapa lisebelisoa tse phahameng tsa tlhahlobo ea temo.

1. Likopo tse Tloaelehileng tsa PCR ea Setso

• Tlhahlobo ea Genotyping le Paternity Testing

• Motheo oa Molek'hule Cloning le Sequencing Tokisetso

• 'Mapa oa DNA le Boitsebiso ba Mefuta

• Lipontšo tsa Laboratori ea Thuto

2. Likopo tse Tloaelehileng tsa PCR ea Nako ea 'Nete

• Ho fumanoa ha Pathogen (mohlala, COVID-19, Influenza, HIV)

• Gene Expression Profileing le mRNA Analysis

• Tšireletseho ea Lijo le Tlhahlobo ea GMO

• Kankere ea Biomarker Discovery le Tlhokomelo

PCR kapa PCR ea Nako ea 'Nete: Ke Efe e Loketseng Lab ea Hau?

Ho etsa qeto ea hore na ke sistimi efe e nepahetseng bakeng sa lab ea hau ho kenyelletsa ho leka-lekanya tekanyetso ea hau khahlanong le tlhoko ea hau ea lebelo, ho nepahala, le botebo ba data; li-laboratory tse shebaneng le lipatlisiso le nts'etsopele hangata li hloka matla a mangata a sistimi ea nako ea nnete, athe tlhahiso e phahameng haholo kapa lits'ebeletso tsa thuto li ka khetha bonolo ba libaesekele tse tloaelehileng tsa mocheso.

Ho etsa khetho e nepahetseng, o tlameha ho qala ka ho lekola molumo oa sampuli ea hau e tloaelehileng le nako e hlokahalang ea ho fetola. Haeba lab ea hau e le tlas'a khatello ea ho fana ka liphetho ka mor'a lihora tse seng kae ho feta matsatsi, Nako ea 'Nete Mochini oa PCR ke eona feela khetho e utloahalang ka lebaka la ts'ebetso ea eona e hlophisitsoeng. Leha ho le joalo, haeba u ntse u sebetsa setsing sa ho qalisa kapa setsi se senyenyane se nang le chelete e fokolang, ho qala ka sebaesekele sa boleng bo phahameng ba setso sa mocheso se ka sebetsana le mesebetsi e mengata e fapaneng pele u fihla ho lisebelisoa tse ngata.

Ntlha e 'ngoe e lokelang ho nahanoa ke tsebo ea basebetsi ba hau. PCR ea Nako ea 'Nete e hloka litsebo tse matla tsa ho qapa le ho toloka ha data, haholo ha e beha metheo le menyako ea litekanyetso tsa Ct. PCR ea setso e tšoarela haholoanyane 'me ho bonolo ho rarolla mathata ho ba qalang. Bakeng sa lits'ebeletso tse ngata tsa sejoale-joale, mokhoa o motle ka ho fetisisa ke oa lebasetere: ho sebelisa mechini ea setso bakeng sa tlhahlobo e tloaelehileng le ho boloka nako ea 'nete o nepahetseng haholo mochini oa PCR oa bakeng sa mesebetsi ea bohlokoa ea tlhahlobo le bongata.

1. Lintlha tsa bohlokoa tsa ho khetha

• Litšitiso tsa Lichelete: Etsa qeto ea hore na chelete ea hau e koahela litšenyehelo tse phahameng tsa li-reagents tsa qPCR.

• Litlhoko tsa data: Etsa qeto ea hore na 'liphetho tse ntle / tse mpe' li lekane kapa haeba lintlha tsa linomoro li tlamehile.

• Likotsi tsa Tšilafalo: qPCR ke sistimi e koetsoeng, e bolokehileng haholo bakeng sa lilaboratori tse sebetsanang le thepa e tšoaetsanoang haholo.

• Litlhoko tsa ho Phahamisa: Lekola hore na nako e bolokiloeng ka ho qoba gel electrophoresis e lokafatsa theko ea mochini.

Mehopolo ea ho Qetela

Ka bokhutšoanyane, le hoja PCR le Real-Time PCR li itšetlehile ka molao-motheo o tšoanang oa ho palama libaesekele tse futhumetseng, li sebeletsa li-niches tse fapaneng ka har'a sechaba sa saense-e 'ngoe e le motheo o tiileng oa boleng' me e 'ngoe e le matla a phahameng a nepahetseng a mangata.

Phetoho ea mochini oa PCR e kentse lekhalo lipakeng tsa lipatlisiso tsa mantlha tsa lefutso le tlhahlobo e potlakileng ea bongaka. PCR ea setso e lula e le sesebelisoa sa bohlokoa bakeng sa ho nolofatsa le ho khoneha, ho e etsa mokokotlo oa ho tsebahatsa liphatsa tsa lefutso le ho kopanya. Ho sa le joalo, PCR ea Nako ea 'Nete e hlalositse bocha maemo a lebelo le kutloelo-bohloko, e lumellang hore ho be le palo e potlakileng ea liphatsa tsa lefutso tse bohlokoa haholo makaleng a kajeno a potlakileng a bongaka le a tikoloho.

Ha thekenoloji e ntse e tsoela pele, lekhalo la litšenyehelo tsa thepa le ntse le fokotseha butle, le etsa hore e be e rarahaneng Theknoloji ea mochini oa PCR e fumaneha habonolo ho lilaboratori tsa boholo bohle. Ho sa tsotellehe hore na u khetha mokhoa ofe, ho netefatsa hore u na le lisebelisoa tsa boleng bo phahameng, tse ka tšeptjoang ke ntlha ea bohlokoa ka ho fetisisa ea ho finyella liphello tse ka hlahisoang hape le tse nepahetseng. Ka ho utloisisa litlhoko tse ikhethileng tsa lits'ebetso tsa hau - e ka ba netefatso e bonolo kapa lipalo tse rarahaneng - o ka tsetela ho thekenoloji e tla tšehetsa kholo ea laboratori ea hau le litlatsetso tsa mahlale lilemong tse tlang.