PCR a me PCR manawa maoli: ʻokoʻa i nā hopena, a me nā noi

Aia ka ʻokoʻa mua ma waena o PCR a me Real-Time PCR (qPCR) i ka pae ʻike: ʻo ka PCR kuʻuna he ala qualitative kahi e nānā ʻia ai nā hopena ma ka hopena o ka hopena (hope-point detection) ma o ka electrophoresis gel, ʻoiai ʻo Real-Time PCR kahi ʻano quantitative e nānā i ka hoʻonui ʻana i ka DNA e like me ka hoʻohana ʻana i nā dyes fluorescent. No laila, hāʻawi ka mīkini PCR no nā noi manawa maoli i ka ʻike kiʻekiʻe a me nā hopena wikiwiki, ʻoiai e pili ana i nā mea hana kiʻekiʻe a me nā kumukūʻai reagent.

ʻO ke koho ʻana i ka ʻenehana kūpono e pili ana i kāu mau koi kikoʻī, ka paʻakikī o kāu mau laʻana, a inā he ʻike maʻalahi kāu pahuhopu a i ʻole ka helu kikoʻī. Hāʻawi kēia alakaʻi i kahi hōʻuluʻulu piha o kēia mau ʻenehana ʻelua e kōkua iā ʻoe e hoʻoholo i ka ʻōnaehana kūpono loa me nā pahuhopu lapaʻau a noiʻi paha o kāu keʻena.

He aha ka PCR?

ʻO ka PCR, a i ʻole Polymerase Chain Reaction, he ʻenehana molecular biology kumu i hoʻohana ʻia no ka hoʻonui ʻana i kahi ʻāpana kikoʻī o ka DNA ma o nā pōʻai pinepine o ka denaturation, annealing, a me ka hoʻolōʻihi ʻana, e hāʻawi ana i kahi hopena qualitative 'ʻae a ʻaʻole' e pili ana i ka loaʻa ʻana o kahi kaʻina pahuhopu.

Ua kapa ʻia ʻo PCR kuʻuna ma ke ʻano he PCR hope no ka mea e ʻike ʻia ka huahana i hoʻonui ʻia ma hope o ka pau ʻana o ke kaʻina holo kaʻa wela wela. Aia ke kaʻina hana i kahi mīkini PCR e hoʻomalu pono i nā loli wela e hoʻomaʻamaʻa i ka replication enzymatic o DNA. Ma ka hoʻohana ʻana i nā primers kikoʻī e hoʻopili ana i ka ʻāpana i hoʻopaʻa ʻia, hiki i ka ʻōnaehana ke hoʻololi i hoʻokahi kope o kahi kaʻina DNA i mau piliona kope i loko o kekahi mau hola. ʻO kēia ulu hoʻonui i hiki ke ʻike i nā helu liʻiliʻi o nā mea genetic i loko o kahi laʻana, inā ʻike ʻia ke kaʻina pahuhopu.

Pono ke kaʻina hana no ka PCR kuʻuna i kahi ʻanuʻu lua no ka nānā ʻana. Ke ka mīkini PCR i nā pōʻai i hoʻonohonoho ʻia, pono e hoʻouka ʻia ka DNA (huahana hoʻonui ʻia) ma luna o kahi gel agarose no ka electrophoresis. hoʻopau Hiki i kēia ʻano hoʻokaʻawale ke hiki i nā mea noiʻi ke hōʻoia i ka nui o nā ʻāpana DNA a hōʻoia i ka hoʻonui ʻia o ka pahuhopu kūpono. No ka mea ʻaʻole hāʻawi kēia ʻano i ka ʻike e pili ana i ka nui mua o ka DNA i loko o ka laʻana, ua hoʻohana mua ʻia ia no nā noi kahi e pono ʻole ai ka quantification, e like me ka genotyping maʻamau a i ʻole ka nānā ʻana i ke alo o kahi pathogen kikoʻī.

Ma ke ʻano ʻenehana, mīkini PCR maʻamau i nā hale hana ma muli o kona paʻa a me ka maʻalahi. noho mau ka Aia ia me kahi poloka wela me nā lua kahi e hoʻokomo ʻia ai nā paipu e paʻa ana i ka hui ʻana. ʻO ka hilinaʻi o kēia mau ʻōnaehana he mea koʻikoʻi ia no nā noi ʻoihana a me nā lāʻau lapaʻau kahi e pono ai ka hoʻonui ʻana i ka DNA kiʻekiʻe i kēlā me kēia lā. No ka ʻike hou aku e pili ana i nā kikoʻī ʻenehana o kēia mau mea hana, hiki iā ʻoe ke ʻimi i ka ʻike kikoʻī ma ehia ke kumukūʻai o ka mīkini PCR a pehea e hana ai.

He aha ka PCR manawa maoli?

ʻO PCR Real-Time, ʻike ʻia hoʻi ʻo quantitative PCR (qPCR), he ʻano kiʻekiʻe o ka hopena kaulahao polymerase e nānā ana i ka hoʻonui ʻana o kahi mole DNA i manaʻo ʻia i ka PCR (ʻo ia hoʻi, i ka manawa maoli), ʻaʻole i kona hopena, me ka hoʻohana ʻana i nā māka fluorescent e helu i ka nui o ka DNA i loaʻa.

ʻAʻole like me nā hana kuʻuna, Real-Time PCR hoʻohui i ka amplification a me ka ʻike ʻana i nā pae i hoʻokahi pae. I ka holo ana o ka mīkini PCR i nā mahana, ua hoʻopaʻa ʻia nā mea hoʻoheheʻe fluorescent a i ʻole nā ​​​​mea noiʻi kikoʻī i loko o ka hui ʻana i ka DNA. ʻO ka ʻōnaehana optical o ka mīkini e ana i ka ikaika o ka fluorescence, e hoʻonui like me ka nui o ka DNA amplified. ʻAe kēia i ka hōʻiliʻili ʻana i ka ʻikepili i ka wā o ka ulu ʻana o ka hopena, e hāʻawi ana i kahi ana pololei loa o ka hoʻomaka ʻana o ka DNA template ma mua o ka nānā ʻana i ka helu hope.

ʻO ka pololei o ka manawa maoli mīkini PCR kekahi o kāna mau pono nui loa. Ma muli o ka hopu ʻia ʻana o ka ʻikepili ma ke kelepona, ʻaʻohe pono no ka hana post-PCR e like me ka electrophoresis gel. ʻAʻole wale kēia e mālama i ka manawa nui i loko o ka lab akā e hōʻemi ana hoʻi i ka hopena o ka haumia ʻana o ke keʻena hana, ʻoiai e hoʻopaʻa mau ʻia nā paipu hopena i ke kaʻina holoʻokoʻa. Hōʻike pinepine ʻia nā hopena ma ke ʻano he pihi hoʻonui ma ka pale kamepiula, kahi e hōʻike ai ka 'Ccycle Threshold' (Ct value) i ke kiko i ʻoi aku ka fluorescence ma mua o ka walaʻau hope. ʻO ka waiwai Ct haʻahaʻa e hōʻike ana i kahi kiʻekiʻe kiʻekiʻe o ka DNA pahuhopu i ka laʻana kumu.

I loko o ka pōʻaiapili o nā diagnostics hou, ua hana ka noi no nā mea hana kiʻekiʻe-sensitative i ka quantitative ʻO ka mīkini PCR ke kūlana gula no ka ʻike ʻana i nā ukana viral, e like me ka hoʻāʻo COVID-19 a i ʻole ka nānā ʻana i ka HIV. ʻO ka hiki ke hoʻokaʻawale i waena o nā ʻokoʻa liʻiliʻi loa i nā pae hōʻike gene e pono ai no ka noiʻi maʻi maʻi a me ka hoʻokele maʻi maʻi. No nā labs e nānā ana e hoʻomaikaʻi, ke koho ʻana i kahi hana kiʻekiʻe mīkini PCR he mea koʻikoʻi no ka hōʻoia ʻana i ka reproducibility ʻikepili a me ka pololei o ka maʻi lapaʻau ma waena o nā ʻano molecular assays.

PCR vs PCR manawa maoli: Nā ʻokoʻa koʻikoʻi

ʻO nā ʻokoʻa koʻikoʻi ma waena o PCR a me Real-Time PCR e pili ana i ka manawa o ka hōʻiliʻili ʻikepili, ke koi no ka hana hope, a me ke kiʻekiʻe o ka naʻau; ʻoiai he qualitative ka PCR kuʻuna a koi aku i ka electrophoresis gel no ka nānā ʻana, ʻoi aku ka nui o ka PCR Real-Time, wikiwiki, a ʻoi aku ka maʻalahi ma muli o kāna ʻōnaehana ʻike maka.

No ka hoʻomaopopo maikaʻi ʻana i ke ʻano o ka hoʻopaʻa ʻana o kēia mau ʻenehana ʻelua, pono e nānā i nā ʻāpana ʻenehana kikoʻī e wehewehe i kā lākou hana. ʻOiai ke hoʻohana nei ʻelua i nā loina kumu like o ka hoʻopiʻi DNA, manawa maoli . mīkini PCR ʻoi aku ka paʻakikī o ka mīkini a me ke kemika i loko o ka

ʻO kekahi o nā mea koʻikoʻi koʻikoʻi ka hoʻonā o ka ʻikepili. Loaʻa i ka PCR kuʻuna ka laulā ikaika a manaʻo pinepine ʻia he mea hana 'semi-quantitative' i ka maikaʻi loa, ʻoiai ʻo ia wale nō ke ana ʻana i ka pae pāpū hope loa o ka hopena. ʻO ka ʻokoʻa, nānā ka manawa maoli mīkini PCR i ka pae exponential, kahi i ʻoi aku ka maikaʻi o ka hopena a me ka wānana o ka mea hoʻomaka. Hoʻolilo kēia i ka PCR Real-Time ke koho i makemake ʻia no nā assays e koi ana i ka pololei kiʻekiʻe, e like me ka hōʻike ʻana i nā gen a i ʻole ka ʻike ʻana i nā hoʻololi ʻokoʻa.

Eia kekahi, ʻaʻole hiki ke hoʻonui i ka pono o ka workflow o Real-Time PCR. Ma ka hoʻopau ʻana i ka hana lima e pili ana i ka hoʻomākaukau ʻana a me ka holo ʻana i nā gel agarose, hiki i nā laboratories ke hoʻonui i kā lākou hana i kēlā me kēia lā. He mea koʻikoʻi kēia no nā laboratories B2B pāʻoihana a i ʻole nā ​​​​halemai e hana ana i nā haneli o nā laʻana i kēlā me kēia lā. I ka loiloi ʻana i ka nā ʻano like ʻole o nā mīkini PCR , pono nā mea hoʻohana e noʻonoʻo ʻoiai ʻoi aku ka kiʻekiʻe o ka hoʻopukapuka mua no qPCR, ʻo ka mālama ʻana i ka hana a me ka hōʻemi ʻana i nā pōʻino contamination e hōʻoia pinepine i ke kumukūʻai no nā hana kiʻekiʻe. Eia hou, no ka luʻu hohonu ʻana i nā ʻāpana kikoʻī e hoʻokau i kēia mau kumukūʻai, hiki iā ʻoe ke heluhelu e pili ana ʻO ke kumukūʻai mīkini PCR a me ka hana.

PCR vs PCR manawa maoli: I ka manawa e hoʻohana ai i kēlā me kēia ʻano

ʻO ke koho ʻana ma waena o PCR a me Real-Time PCR e pili ana inā makemake kāu papahana i ka ʻike maʻalahi o ka DNA a i ʻole ka helu kikoʻī; He kūpono ka PCR kuʻuna no ka cloning maʻamau a me ka genotyping, ʻoiai he mea nui ka PCR Real-Time no ka nānā ʻana i ka hoʻouka viral a me ka nānā ʻana i ka hōʻike gene.

No nā hana hoʻokolohua maʻamau, ke kiʻekiʻe o ka mīkini PCR manawa maoli. ʻaʻole pono Ma nā noi e like me ka cloning molecular kumu a i ʻole ka hōʻoia ʻana i ka kūleʻa o kahi ʻoki DNA, hāʻawi ka PCR kuʻuna i kahi hopena kūpono a hilinaʻi. Hoʻohana nui ʻia ia i ka hoʻonaʻauao a me ka ʻepekema forensic kahi o ka pahuhopu mua e hōʻoia i ka nui o kahi ʻāpana DNA ma mua o ka hoʻoholo pololei ʻana i ka nui o nā kope i loko o ka laʻana kumu.

Ma ka ʻaoʻao ʻē aʻe, pono e hoʻohana i ka PCR Real-Time nā diagnostics clinical a me ka noiʻi e kālele ana i ka 'pehea ka nui' o kahi pahuhopu. Ma ke kahua lapaʻau, ʻo ka hiki ke hoʻohālikelike i ke ʻano o ka maʻi maʻi i loko o ke koko o ka mea maʻi he mea nui ia no ka hoʻoholo ʻana i ka paʻakikī o kahi maʻi a i ʻole ka hopena o kahi lapaʻau. Eia kekahi, ʻo ka wikiwiki kiʻekiʻe o Real-Time PCR ka mea i koho maikaʻi ʻia no nā kaiapuni pili i ka manawa, e like me nā kikowaena diagnostic pilikia a i ʻole nā ​​​​mea hoʻāʻo mahiʻai kiʻekiʻe.

1. Nā noi maʻamau no ka PCR Kuʻuna

• ʻO ka hoʻāʻo ʻana i ka genotyping a me ka makua kāne

• Ka Hoʻomākaukau ʻana i nā Molecular Cloning a me Sequencing

• ʻO ka palapala ʻāina DNA a me ka ʻike ʻana i nā ʻano

• Nā Hōʻikeʻike ʻOihana Hoʻonaʻauao

2. Nā noi maʻamau no PCR manawa maoli

• ʻIke ʻana i nā mea maʻi (e laʻa, COVID-19, Influenza, HIV)

• Hōʻike Hōʻike Gene a me ka Nānā mRNA

• Palekana Meaʻai a me ka ʻike GMO

• ʻIke ʻia a me ka nānā ʻana o Cancer Biomarker

PCR a i ʻole PCR manawa maoli: ʻo wai ka mea kūpono no kāu lab?

ʻO ka hoʻoholo ʻana i ka ʻōnaehana kūpono no kāu lab e pili ana i ke kaulike ʻana i kāu kālā me kāu pono no ka wikiwiki, pololei, a me ka hohonu o ka ʻikepili; ʻO nā labs e nānā pono ana i ka noiʻi a me ka hoʻomohala ʻana e koi pinepine i ka mana quantitative o kahi ʻōnaehana manawa maoli, ʻoiai ʻoi aku ka nui o ka hana kiʻekiʻe a i ʻole nā ​​​​mea hoʻonaʻauao i ka maʻalahi o nā mea hoʻokele wela kahiko.

No ka hana ʻana i ke koho kūpono, pono ʻoe e loiloi mua i ka nui o ka laʻana maʻamau a me ka manawa huli e pono ai. Inā pilikia kāu lab e hāʻawi i nā hopena i loko o nā hola ma mua o nā lā, he manawa maoli ʻO ka mīkini PCR wale nō ke koho kūpono ma muli o kāna kahe hana streamlined. Eia nō naʻe, inā e holo ana ʻoe i kahi hoʻomaka a i ʻole kahi hale liʻiliʻi me ka liʻiliʻi o ke kālā, e hoʻomaka me kahi kaʻa kaʻa wela maʻamau kiʻekiʻe e hiki ke lawelawe i nā ʻano hana like ʻole ma mua o kou piʻi ʻana i nā lako quantitative.

ʻO kekahi kumu e noʻonoʻo ai ʻo ia ke akamai o kāu limahana. Pono ʻo PCR Real-Time i ka hoʻolālā hoʻokolohua ʻoi aku ka ikaika a me nā mākau wehewehe ʻikepili, ʻoiai ke kau ʻana i nā palena a me nā paepae no nā waiwai Ct. ʻOi aku ka kala ʻana o ka PCR kuʻuna a maʻalahi hoʻi e hoʻoponopono pilikia no ka poʻe hoʻomaka. No ka nui o nā hale hana hou, ʻo ke ala maikaʻi loa he huila: hoʻohana i nā mīkini kuʻuna no ka nānā maʻamau a me ka mālama ʻana i ka Real-Time kiʻekiʻe mīkini PCR no nā hana diagnostic koʻikoʻi a me ka nui.

1. Koho Koho Ki

• Nā Palena Waiwai: E hoʻoholo inā e uhi kāu kālā i ke kumu kūʻai kiʻekiʻe o nā reagents qPCR.

• Koi ʻIkepili: E hoʻoholo inā lawa nā hualoaʻa 'positive/negative' a inā koi ʻia ka ʻikepili helu.

• Nā pilikia o ka hoʻohaumia ʻana: ʻo qPCR kahi ʻōnaehana pani-paʻa, ʻoi aku ka palekana no nā labs e lawelawe ana i nā mea maʻi maʻi.

• Nā Pono Loa: E loiloi inā ʻo ka manawa i mālama ʻia ma ka pale ʻana i ka electrophoresis gel e hōʻoia i ke kumukūʻai o ka mīkini.

Nā Manaʻo Hope

I ka hōʻuluʻulu manaʻo, ʻoiai ke hilinaʻi nei ʻo PCR a me Real-Time PCR i ke kumu kumu like o ke kaʻa kaʻa wela, lawelawe lākou i nā niches ʻokoʻa i loko o ke kaiāulu ʻepekema-ʻo kekahi ma ke ʻano he kumu kūpono kūpono a ʻo kekahi he hale mana quantitative kiʻekiʻe.

ʻO ka hoʻomohala ʻana o ka mīkini PCR ua hoʻopili i ka ʻokoʻa ma waena o ka noiʻi genetic maʻamau a me nā diagnostics clinical wikiwiki. ʻO ka PCR kuʻuna he mea pono loa ia no ka maʻalahi a me ka maʻalahi, e lilo ia i iwi kuamoʻo o ka ʻike genetic a me ka cloning. I kēia manawa, ua hoʻololi hou ʻo Real-Time PCR i nā kūlana o ka wikiwiki a me ka naʻau, e ʻae i ka helu koke ʻana o nā mea genetic i koʻikoʻi i nā lāʻau lapaʻau a me nā kaiapuni wikiwiki.

Ke hoʻomau nei ka ʻenehana i ka holomua, e hōʻemi mālie ana ka ʻāpana o nā kumukūʻai mea hana, e hana maʻalahi ʻOi aku ka maʻalahi o ka ʻenehana mīkini PCR i nā laboratories o nā nui āpau. ʻO ke ʻano o ke ʻano āu e koho ai, ʻo ka hōʻoia ʻana i loaʻa iā ʻoe nā lako kiʻekiʻe a hilinaʻi ka mea koʻikoʻi loa i ka loaʻa ʻana o nā hopena reproducible a pololei. Ma ka hoʻomaopopo ʻana i nā pono kikoʻī o kāu mau noi—he hōʻoia maʻalahi a i ʻole ka helu paʻakikī—hiki iā ʻoe ke hoʻolilo i ka ʻenehana e kākoʻo maikaʻi i ka ulu ʻana o kāu keʻena hana a me nā haʻawina ʻepekema no nā makahiki e hiki mai ana.