PCR ແລະ PCR ໃນເວລາຈິງ: ຄວາມແຕກຕ່າງໃນຜົນໄດ້ຮັບ, ແລະຄໍາຮ້ອງສະຫມັກ

ຄວາມແຕກຕ່າງຕົ້ນຕໍລະຫວ່າງ PCR ແລະ Real-Time PCR (qPCR) ແມ່ນຢູ່ໃນໄລຍະການກວດສອບ: PCR ແບບດັ້ງເດີມແມ່ນວິທີການທີ່ມີຄຸນນະພາບທີ່ຜົນໄດ້ຮັບຖືກວິເຄາະໃນຕອນທ້າຍຂອງຕິກິຣິຍາ (ການກວດຫາຈຸດສິ້ນສຸດ) ຜ່ານ gel electrophoresis, ໃນຂະນະທີ່ PCR ໃນເວລາຈິງແມ່ນວິທີການປະລິມານທີ່ຕິດຕາມການຂະຫຍາຍ DNA ຍ້ອນວ່າມັນເກີດຂື້ນໂດຍໃຊ້ສີຍ້ອມ fluorescent. ດັ່ງນັ້ນ, ເຄື່ອງ PCR ສໍາລັບຄໍາຮ້ອງສະຫມັກໃນເວລາທີ່ແທ້ຈິງສະຫນອງຄວາມອ່ອນໄຫວທີ່ສູງຂຶ້ນແລະຜົນໄດ້ຮັບໄວຂຶ້ນ, ເຖິງແມ່ນວ່າໂດຍທົ່ວໄປແລ້ວມັນປະກອບດ້ວຍອຸປະກອນທີ່ສູງຂຶ້ນແລະຄ່າໃຊ້ຈ່າຍໃນການ reagent.

ການເລືອກເທກໂນໂລຍີທີ່ເຫມາະສົມແມ່ນຂຶ້ນກັບຄວາມຕ້ອງການຜ່ານສະເພາະຂອງທ່ານ, ຄວາມສັບສົນຂອງຕົວຢ່າງຂອງທ່ານແລະວ່າເປົ້າຫມາຍຂອງທ່ານແມ່ນການກໍານົດທີ່ງ່າຍດາຍຫຼືການກໍານົດປະລິມານທີ່ຊັດເຈນ. ຄູ່ມືນີ້ສະຫນອງການແບ່ງອອກຢ່າງກວ້າງຂວາງຂອງສອງເຕັກໂນໂລຢີນີ້ເພື່ອຊ່ວຍໃຫ້ທ່ານກໍານົດວ່າລະບົບໃດທີ່ເຫມາະສົມທີ່ສຸດກັບຈຸດປະສົງທາງດ້ານການຊ່ວຍຫຼືການຄົ້ນຄວ້າຂອງຫ້ອງທົດລອງຂອງທ່ານ.

PCR ແມ່ນຫຍັງ?

PCR, ຫຼື Polymerase Chain Reaction, ແມ່ນເຕັກນິກຊີວະວິທະຍາໂມເລກຸນພື້ນຖານທີ່ໃຊ້ໃນການຂະຫຍາຍສ່ວນສະເພາະຂອງ DNA ໂດຍຜ່ານຮອບວຽນຂອງ denaturation, annealing, ແລະ elongation ຊ້ໍາຊ້ອນ, ສະຫນອງຜົນໄດ້ຮັບທີ່ມີຄຸນນະພາບ 'ແມ່ນຫຼືບໍ່ແມ່ນ' ກ່ຽວກັບການປະກົດຕົວຂອງລໍາດັບເປົ້າຫມາຍ.

PCR ແບບດັ້ງເດີມມັກຈະເອີ້ນວ່າ PCR ຈຸດສິ້ນສຸດເນື່ອງຈາກວ່າການກວດພົບຜະລິດຕະພັນຂະຫຍາຍໃຫຍ່ຂື້ນເກີດຂື້ນພຽງແຕ່ຫຼັງຈາກຂະບວນການວົງຈອນຄວາມຮ້ອນທັງຫມົດສໍາເລັດ. ຂະບວນການປະກອບມີ ເຄື່ອງ PCR ທີ່ຄວບຄຸມການປ່ຽນແປງອຸນຫະພູມຢ່າງແນ່ນອນເພື່ອຄວາມສະດວກໃນການຈໍາລອງ enzymatic ຂອງ DNA. ໂດຍການນໍາໃຊ້ primers ສະເພາະທີ່ flank ພາກພື້ນເປົ້າຫມາຍ, ລະບົບສາມາດປ່ຽນສໍາເນົາດຽວຂອງລໍາດັບ DNA ເປັນພັນລ້ານສໍາເນົາພາຍໃນສອງສາມຊົ່ວໂມງ. ການຂະຫຍາຍຕົວຂອງຕົວເລກນີ້ເຮັດໃຫ້ມັນເປັນໄປໄດ້ທີ່ຈະກວດພົບເຖິງແມ່ນນາທີຂອງສານພັນທຸກໍາໃນຕົວຢ່າງຫນຶ່ງ, ໃຫ້ລໍາດັບເປົ້າຫມາຍທີ່ຮູ້ຈັກ.

ຂະບວນການເຮັດວຽກສໍາລັບ PCR ແບບດັ້ງເດີມໂດຍປົກກະຕິຮຽກຮ້ອງໃຫ້ມີຂັ້ນຕອນທີສອງສໍາລັບການເບິ່ງເຫັນ. ເມື່ອ ເຄື່ອງ PCR ໄດ້ສໍາເລັດວົງຈອນໂຄງການ, DNA ຜົນໄດ້ຮັບ (ຜະລິດຕະພັນຂະຫຍາຍ) ຕ້ອງໄດ້ຮັບການໂຫຼດໃສ່ agarose gel ສໍາລັບ electrophoresis. ເຕັກນິກການແຍກນີ້ຊ່ວຍໃຫ້ນັກຄົ້ນຄວ້າຢືນຢັນຂະຫນາດຂອງຊິ້ນ DNA ແລະກວດສອບວ່າເປົ້າຫມາຍທີ່ຖືກຕ້ອງຖືກຂະຫຍາຍອອກ. ເນື່ອງຈາກວ່າວິທີການນີ້ບໍ່ໄດ້ສະຫນອງຂໍ້ມູນກ່ຽວກັບຈໍານວນ DNA ເບື້ອງຕົ້ນໃນຕົວຢ່າງ, ມັນຖືກນໍາໃຊ້ຕົ້ນຕໍສໍາລັບຄໍາຮ້ອງສະຫມັກທີ່ປະລິມານບໍ່ຈໍາເປັນ, ເຊັ່ນ: genotyping ພື້ນຖານຫຼືການກວດສອບການປະກົດຕົວຂອງເຊື້ອພະຍາດສະເພາະ.

ທາງດ້ານເທກໂນໂລຍີ, ເຄື່ອງ PCR ແບບດັ້ງເດີມ ຍັງຄົງເປັນຫຼັກໃນຫ້ອງທົດລອງເນື່ອງຈາກຄວາມທົນທານແລະຄວາມງ່າຍດາຍຂອງມັນ. ມັນປະກອບດ້ວຍຕັນຄວາມຮ້ອນທີ່ມີຮູທີ່ທໍ່ທີ່ຖືການປະສົມປະຕິກິລິຢາຖືກໃສ່. ຄວາມຫນ້າເຊື່ອຖືຂອງລະບົບເຫຼົ່ານີ້ແມ່ນສໍາຄັນສໍາລັບການນໍາໃຊ້ອຸດສາຫະກໍາແລະທາງດ້ານການຊ່ວຍບ່ອນທີ່ການຂະຫຍາຍ DNA ປະລິມານສູງແມ່ນຄວາມຕ້ອງການປະຈໍາວັນ. ເພື່ອເຂົ້າໃຈເພີ່ມເຕີມກ່ຽວກັບສະເພາະດ້ານວິຊາການຂອງອຸປະກອນເຫຼົ່ານີ້, ທ່ານສາມາດຄົ້ນຫາລາຍລະອຽດກ່ຽວກັບ ຄ່າໃຊ້ຈ່າຍຂອງເຄື່ອງ PCR ແລະວິທີການເຮັດວຽກ.

PCR ເວລາຈິງແມ່ນຫຍັງ?

PCR ໃນເວລາຈິງ, ເຊິ່ງເອີ້ນກັນວ່າ PCR ປະລິມານ (qPCR), ແມ່ນຮູບແບບກ້າວຫນ້າທາງດ້ານຂອງປະຕິກິລິຍາລະບົບຕ່ອງໂສ້ polymerase ທີ່ຕິດຕາມການຂະຫຍາຍໂມເລກຸນ DNA ທີ່ຖືກເປົ້າຫມາຍໃນລະຫວ່າງ PCR (ເຊັ່ນ, ໃນເວລາຈິງ), ບໍ່ແມ່ນໃນຕອນທ້າຍ, ການນໍາໃຊ້ເຄື່ອງຫມາຍ fluorescent ເພື່ອກໍານົດປະລິມານຂອງ DNA.

ບໍ່ເຫມືອນກັບວິທີການແບບດັ້ງເດີມ, PCR ໃນເວລາຈິງຈະລວມເອົາໄລຍະການຂະຫຍາຍແລະການກວດພົບເຂົ້າໄປໃນຂັ້ນຕອນດຽວ. ໃນຂະນະທີ່ ເຄື່ອງ PCR ໝູນວຽນຜ່ານອຸນຫະພູມ, ສີຍ້ອມ fluorescent ຫຼື ລຳ ດັບສະເພາະເຈາະຈົງພາຍໃນສ່ວນປະສົມປະຕິກິລິຍາຜູກມັດກັບ DNA. ລະບົບ optical ຂອງເຄື່ອງຈັກວັດແທກຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ fluorescence, ເຊິ່ງເພີ່ມຂຶ້ນຕາມອັດຕາສ່ວນຂອງ DNA ຂະຫຍາຍໃຫຍ່ຂື້ນ. ນີ້ອະນຸຍາດໃຫ້ເກັບກໍາຂໍ້ມູນໃນໄລຍະການຂະຫຍາຍຕົວຂອງຕິກິຣິຍາ exponential, ສະຫນອງການວັດແທກທີ່ຖືກຕ້ອງຫຼາຍຂອງຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນເລີ່ມຕົ້ນຂອງ DNA ຂອງແມ່ແບບກ່ວາການວິເຄາະຈຸດສິ້ນສຸດທີ່ເຄີຍເຮັດໄດ້.

ຄວາມແມ່ນຍໍາຂອງ ເຄື່ອງ PCR ໃນເວລາທີ່ແທ້ຈິງ ແມ່ນຫນຶ່ງໃນຂໍ້ໄດ້ປຽບທີ່ສໍາຄັນຂອງມັນ. ເນື່ອງຈາກວ່າຂໍ້ມູນຖືກຈັບເປັນດິຈິຕອນ, ບໍ່ຈໍາເປັນຕ້ອງມີການປຸງແຕ່ງຫຼັງ PCR ເຊັ່ນ gel electrophoresis. ນີ້ບໍ່ພຽງແຕ່ຊ່ວຍປະຢັດເວລາທີ່ສໍາຄັນໃນຫ້ອງທົດລອງ, ແຕ່ຍັງຫຼຸດຜ່ອນຄວາມສ່ຽງຂອງການປົນເປື້ອນໃນຫ້ອງທົດລອງ, ເນື່ອງຈາກວ່າທໍ່ຕິກິຣິຍາຍັງຄົງປະທັບຕາຕະຫຼອດຂະບວນການທັງຫມົດ. ໂດຍທົ່ວໄປແລ້ວຜົນໄດ້ຮັບຈະຖືກສະແດງເປັນເສັ້ນໂຄ້ງຂະຫຍາຍຢູ່ໃນໜ້າຈໍຄອມພິວເຕີ, ເຊິ່ງ 'Cycle Threshold' (ຄ່າ Ct) ຊີ້ບອກຈຸດທີ່ fluorescence ເກີນສຽງລົບກວນໃນພື້ນຫຼັງ. ຄ່າ Ct ຕ່ໍາສະແດງເຖິງຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ DNA ເປົ້າຫມາຍທີ່ສູງຂຶ້ນໃນຕົວຢ່າງຕົ້ນສະບັບ.

ໃນສະພາບການວິນິດໄສທີ່ທັນສະໄຫມ, ຄວາມຕ້ອງການອຸປະກອນທີ່ມີຄວາມອ່ອນໄຫວສູງໄດ້ເຮັດໃຫ້ປະລິມານ. ເຄື່ອງ PCR ເປັນມາດຕະຖານທອງສໍາລັບການກວດສອບການໂຫຼດຂອງໄວຣັສ, ເຊັ່ນໃນການທົດສອບ COVID-19 ຫຼືການຕິດຕາມ HIV. ຄວາມສາມາດໃນການຈໍາແນກລະຫວ່າງຄວາມແຕກຕ່າງຂະຫນາດນ້ອຍຫຼາຍໃນລະດັບການສະແດງອອກຂອງ gene ເຮັດໃຫ້ມັນຂາດບໍ່ໄດ້ສໍາລັບການຄົ້ນຄວ້າມະເຮັງແລະການຄຸ້ມຄອງພະຍາດຕິດຕໍ່. ສໍາລັບຫ້ອງທົດລອງທີ່ກໍາລັງຊອກຫາການຍົກລະດັບ, ການເລືອກ ເຄື່ອງ PCR ທີ່ມີປະສິດທິພາບສູງ ແມ່ນສໍາຄັນສໍາລັບການຮັບປະກັນການແຜ່ພັນຂໍ້ມູນແລະຄວາມຖືກຕ້ອງທາງດ້ານຄລີນິກໃນທົ່ວການວິເຄາະໂມເລກຸນຕ່າງໆ.

PCR ທຽບກັບ PCR ເວລາຈິງ: ຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ສໍາຄັນ

ຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ສໍາຄັນລະຫວ່າງ PCR ແລະ Real-Time PCR ກ່ຽວຂ້ອງກັບການກໍານົດເວລາຂອງການເກັບກໍາຂໍ້ມູນ, ຄວາມຕ້ອງການສໍາລັບການປຸງແຕ່ງຫຼັງການປຸງແຕ່ງ, ແລະລະດັບຄວາມອ່ອນໄຫວ; ໃນຂະນະທີ່ PCR ແບບດັ້ງເດີມມີຄຸນນະພາບແລະຕ້ອງການ gel electrophoresis ສໍາລັບການເບິ່ງເຫັນ, PCR ໃນເວລາຈິງແມ່ນເປັນປະລິມານ, ໄວກວ່າ, ແລະມີຄວາມອ່ອນໄຫວຫຼາຍເນື່ອງຈາກລະບົບກວດຈັບ optical ປະສົມປະສານຂອງມັນ.

ເພື່ອເຂົ້າໃຈດີກວ່າວິທີການທັງສອງເຕັກໂນໂລຢີນີ້ stack ຂຶ້ນ, ມັນເປັນປະໂຫຍດທີ່ຈະເບິ່ງຕົວກໍານົດການດ້ານວິຊາການສະເພາະທີ່ກໍານົດການດໍາເນີນງານຂອງພວກເຂົາ. ໃນຂະນະທີ່ທັງສອງນໍາໃຊ້ຫຼັກການພື້ນຖານດຽວກັນຂອງການຈໍາລອງ DNA, ຮາດແວແລະເຄມີທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບ ເຄື່ອງ PCR ໃນເວລາທີ່ແທ້ຈິງ ແມ່ນມີຄວາມຊັບຊ້ອນຫຼາຍ.

ຫນຶ່ງໃນຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ສໍາຄັນແມ່ນຄວາມລະອຽດຂອງຂໍ້ມູນ. PCR ແບບດັ້ງເດີມມີຂອບເຂດການເຄື່ອນໄຫວທີ່ຈໍາກັດແລະມັກຈະຖືວ່າເປັນເຄື່ອງມື 'ເຄິ່ງປະລິມານ' ທີ່ດີທີ່ສຸດ, ຍ້ອນວ່າມັນພຽງແຕ່ວັດແທກໄລຍະສຸດທ້າຍຂອງຕິກິຣິຍາ. ໃນທາງກົງກັນຂ້າມ, ເຄື່ອງ PCR ໃນເວລາທີ່ແທ້ຈິງ ຈະຕິດຕາມກວດກາໄລຍະ exponential, ບ່ອນທີ່ປະຕິກິລິຍາແມ່ນປະສິດທິພາບທີ່ສຸດແລະການຄາດຄະເນຂອງອຸປະກອນການເລີ່ມຕົ້ນ. ນີ້ເຮັດໃຫ້ PCR ໃນເວລາຈິງເປັນທາງເລືອກທີ່ຕ້ອງການສໍາລັບການວິເຄາະທີ່ຕ້ອງການຄວາມແມ່ນຍໍາສູງ, ເຊັ່ນ: gene expression profiling ຫຼືກໍານົດການກາຍພັນທີ່ຫາຍາກ.

ຍິ່ງໄປກວ່ານັ້ນ, ປະສິດທິພາບການເຮັດວຽກຂອງ PCR ໃນເວລາຈິງບໍ່ສາມາດເວົ້າເກີນ. ໂດຍການກໍາຈັດແຮງງານຄູ່ມືທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບການກະກຽມແລະແລ່ນ gels agarose, ຫ້ອງທົດລອງສາມາດເພີ່ມປະລິມານການຜະລິດປະຈໍາວັນຂອງພວກເຂົາ. ນີ້ແມ່ນສິ່ງສໍາຄັນໂດຍສະເພາະສໍາລັບຫ້ອງທົດລອງ B2B ການຄ້າຫຼືໂຮງຫມໍທີ່ປຸງແຕ່ງຫຼາຍຮ້ອຍຕົວຢ່າງປະຈໍາວັນ. ໃນ​ເວ​ລາ​ທີ່​ການ​ປະ​ເມີນ​ຜົນ​ ເຄື່ອງຈັກ PCR ປະເພດຕ່າງໆ , ຜູ້ໃຊ້ຄວນພິຈາລະນາວ່າໃນຂະນະທີ່ການລົງທຶນເບື້ອງຕົ້ນສໍາລັບ qPCR ແມ່ນສູງກວ່າ, ການປະຫຍັດແຮງງານແລະຄວາມສ່ຽງຕໍ່ການປົນເປື້ອນຫຼຸດລົງມັກຈະເຮັດໃຫ້ຄ່າໃຊ້ຈ່າຍໃນການດໍາເນີນງານທີ່ມີປະລິມານສູງ. ນອກຈາກນັ້ນ, ສໍາລັບການລົງເລິກເຂົ້າໄປໃນອົງປະກອບສະເພາະທີ່ຂັບລົດຄ່າໃຊ້ຈ່າຍເຫຼົ່ານີ້, ທ່ານສາມາດອ່ານກ່ຽວກັບ ລາຄາເຄື່ອງ PCR ແລະການເຮັດວຽກ.

PCR vs real-time PCR: ເມື່ອໃດທີ່ຈະໃຊ້ແຕ່ລະວິທີ

ການເລືອກລະຫວ່າງ PCR ແລະ Real-Time PCR ແມ່ນຂຶ້ນກັບວ່າໂຄງການຂອງທ່ານຮຽກຮ້ອງໃຫ້ມີການກວດຫາ DNA ທີ່ງ່າຍດາຍຫຼືປະລິມານທີ່ຊັດເຈນ; PCR ແບບດັ້ງເດີມແມ່ນເຫມາະສົມສໍາລັບການ cloning ແລະ genotyping ພື້ນຖານ, ໃນຂະນະທີ່ PCR ໃນເວລາຈິງແມ່ນມີຄວາມຈໍາເປັນສໍາລັບການກວດສອບການໂຫຼດໄວຣັດແລະການວິເຄາະການສະແດງອອກຂອງເຊື້ອສາຍ.

ສໍາລັບວຽກງານຫ້ອງທົດລອງປົກກະຕິຈໍານວນຫຼາຍ, ຄວາມອ່ອນໄຫວສູງຂອງ ເຄື່ອງ PCR ໃນເວລາທີ່ແທ້ຈິງ ອາດຈະບໍ່ຈໍາເປັນ. ໃນຄໍາຮ້ອງສະຫມັກຕ່າງໆເຊັ່ນ cloning ໂມເລກຸນພື້ນຖານຫຼືການກວດສອບຜົນສໍາເລັດຂອງການສະກັດເອົາ DNA, PCR ແບບດັ້ງເດີມສະຫນອງການແກ້ໄຂຄ່າໃຊ້ຈ່າຍແລະເຊື່ອຖືໄດ້. ມັນຍັງຖືກນໍາໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງໃນການສຶກສາແລະວິທະຍາສາດ forensic ທີ່ເປົ້າຫມາຍຕົ້ນຕໍແມ່ນເພື່ອຢືນຢັນຂະຫນາດຂອງຊິ້ນ DNA ແທນທີ່ຈະກໍານົດວ່າຈໍານວນສໍາເນົາຢູ່ໃນຕົວຢ່າງຕົ້ນສະບັບ.

ໃນທາງກົງກັນຂ້າມ, ການວິນິດໄສທາງຄລີນິກແລະການຄົ້ນຄວ້າທີ່ເນັ້ນໃສ່ 'ຫຼາຍປານໃດ' ຂອງເປົ້າຫມາຍແມ່ນຕ້ອງໃຊ້ PCR ໃນເວລາຈິງ. ໃນຂົງເຂດການແພດ, ຄວາມສາມາດໃນການປະເມີນຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງໄວຣັດໃນເລືອດຂອງຄົນເຈັບແມ່ນມີຄວາມ ສຳ ຄັນໃນການ ກຳ ນົດຄວາມຮ້າຍແຮງຂອງການຕິດເຊື້ອຫຼືປະສິດທິຜົນຂອງການປິ່ນປົວ. ຍິ່ງໄປກວ່ານັ້ນ, ຄວາມໄວສູງຂອງ PCR ເວລາຈິງເຮັດໃຫ້ມັນເປັນທາງເລືອກທີ່ມັກສໍາລັບສະພາບແວດລ້ອມທີ່ລະອຽດອ່ອນ, ເຊັ່ນ: ສູນວິນິດໄສສຸກເສີນຫຼືສະຖານທີ່ທົດສອບກະສິກໍາທີ່ມີຄວາມໄວສູງ.

1. ຄໍາຮ້ອງສະຫມັກທົ່ວໄປສໍາລັບ PCR ແບບດັ້ງເດີມ

• Genotyping ແລະການທົດສອບຄວາມເປັນພໍ່

• ການ​ກະ​ກຽມ​ການ cloning ໂມ​ເລ​ກຸນ​ຂັ້ນ​ພື້ນ​ຖານ​ແລະ​ລໍາ​ດັບ​

• ການສ້າງແຜນທີ່ DNA ແລະການກໍານົດຊະນິດ

• ການສາທິດຫ້ອງທົດລອງການສຶກສາ

2. ຄໍາຮ້ອງສະຫມັກທົ່ວໄປສໍາລັບ PCR ເວລາຈິງ

• ການກວດຫາເຊື້ອພະຍາດ (ເຊັ່ນ: COVID-19, ໄຂ້ຫວັດໃຫຍ່, HIV)

• Gene Expression Profiling ແລະການວິເຄາະ mRNA

• ຄວາມປອດໄພຂອງອາຫານ ແລະການກວດຫາ GMO

• ການຄົ້ນພົບ ແລະການຕິດຕາມມະເຮັງ Biomarker

PCR ຫຼື PCR ໃນເວລາຈິງ: ອັນໃດທີ່ເຫມາະສົມສໍາລັບຫ້ອງທົດລອງຂອງເຈົ້າ?

ການຕັດສິນໃຈວ່າລະບົບໃດທີ່ເຫມາະສົມສໍາລັບຫ້ອງທົດລອງຂອງທ່ານກ່ຽວຂ້ອງກັບການດຸ່ນດ່ຽງງົບປະມານຂອງທ່ານກັບຄວາມຕ້ອງການຂອງທ່ານສໍາລັບຄວາມໄວ, ຄວາມຖືກຕ້ອງ, ແລະຄວາມເລິກຂອງຂໍ້ມູນ; ຫ້ອງທົດລອງທີ່ສຸມໃສ່ການຄົ້ນຄວ້າແລະການພັດທະນາມັກຈະຕ້ອງການພະລັງງານທາງດ້ານປະລິມານຂອງລະບົບເວລາທີ່ແທ້ຈິງ, ໃນຂະນະທີ່ການຜະລິດທີ່ມີປະລິມານສູງຫຼືສະຖານທີ່ການສຶກສາອາດຈະມັກຄວາມງ່າຍດາຍຂອງເຄື່ອງປັ່ນຄວາມຮ້ອນແບບດັ້ງເດີມ.

ເພື່ອເຮັດໃຫ້ການເລືອກທີ່ຖືກຕ້ອງ, ກ່ອນອື່ນ ໝົດ ທ່ານຕ້ອງປະເມີນປະລິມານຕົວຢ່າງປົກກະຕິຂອງທ່ານແລະເວລາປ່ຽນທີ່ຕ້ອງການ. ຖ້າຫ້ອງທົດລອງຂອງທ່ານຢູ່ພາຍໃຕ້ຄວາມກົດດັນເພື່ອໃຫ້ຜົນໄດ້ຮັບພາຍໃນຊົ່ວໂມງແທນທີ່ຈະເປັນມື້, ແບບ Real-Time ເຄື່ອງ PCR ເປັນທາງເລືອກຢ່າງມີເຫດຜົນອັນດຽວເນື່ອງຈາກຂະບວນການເຮັດວຽກທີ່ຄ່ອງຕົວຂອງມັນ. ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ຖ້າທ່ານກໍາລັງດໍາເນີນການເລີ່ມຕົ້ນຫຼືສະຖານທີ່ຂະຫນາດນ້ອຍທີ່ມີເງິນທຶນຈໍາກັດ, ເລີ່ມຕົ້ນດ້ວຍເຄື່ອງຈັກຄວາມຮ້ອນແບບດັ້ງເດີມທີ່ມີຄຸນນະພາບສູງສາມາດຈັດການກັບວຽກງານທີ່ຫລາກຫລາຍກ່ອນທີ່ທ່ານຈະຂະຫຍາຍອຸປະກອນປະລິມານ.

ປັດໄຈອື່ນທີ່ຄວນພິຈາລະນາແມ່ນຄວາມຊໍານານຂອງພະນັກງານຂອງທ່ານ. PCR ໃນເວລາຈິງຮຽກຮ້ອງໃຫ້ມີການອອກແບບການວິເຄາະແລະທັກສະການຕີຄວາມຂໍ້ມູນຢ່າງເຂັ້ມງວດ, ໂດຍສະເພາະໃນເວລາທີ່ກໍານົດພື້ນຖານແລະຂອບເຂດສໍາລັບຄ່າ Ct. PCR ແບບດັ້ງເດີມແມ່ນໃຫ້ອະໄພຫຼາຍກວ່າແລະງ່າຍຕໍ່ການແກ້ໄຂບັນຫາສໍາລັບຜູ້ເລີ່ມຕົ້ນ. ສໍາລັບສິ່ງອໍານວຍຄວາມສະດວກທີ່ທັນສະໄຫມຈໍານວນຫຼາຍ, ວິທີການທີ່ດີທີ່ສຸດແມ່ນແບບປະສົມ: ການນໍາໃຊ້ເຄື່ອງຈັກແບບດັ້ງເດີມສໍາລັບການກວດສອບປົກກະຕິແລະການຈອງ ເຄື່ອງ PCR ທີ່ແທ້ຈິງທີ່ໃຊ້ເວລາທີ່ມີຄວາມແມ່ນຍໍາສູງ ສໍາລັບວຽກງານການວິນິດໄສແລະປະລິມານທີ່ສໍາຄັນ.

1. ເງື່ອນໄຂການຄັດເລືອກຫຼັກ

• ຂໍ້ຈໍາກັດດ້ານງົບປະມານ: ກໍານົດວ່າທຶນຂອງທ່ານກວມເອົາຄ່າໃຊ້ຈ່າຍທີ່ສູງຂຶ້ນຂອງ reagents qPCR.

• ຄວາມຕ້ອງການຂໍ້ມູນ: ຕັດສິນໃຈວ່າຜົນໄດ້ຮັບ 'ບວກ/ລົບ' ພຽງພໍ ຫຼືຖ້າຂໍ້ມູນຕົວເລກແມ່ນບັງຄັບ.

• ຄວາມສ່ຽງຕໍ່ການປົນເປື້ອນ: qPCR ແມ່ນລະບົບທໍ່ປິດ, ເຊິ່ງມີຄວາມປອດໄພກວ່າຫຼາຍສໍາລັບຫ້ອງທົດລອງທີ່ຈັດການວັດສະດຸທີ່ຕິດເຊື້ອສູງ.

• ຄວາມຕ້ອງການຜ່ານ: ປະເມີນວ່າເວລາທີ່ປະຫຍັດໂດຍການຫຼີກເວັ້ນການ gel electrophoresis justifies ລາຄາຂອງເຄື່ອງຈັກ.

ຄວາມຄິດສຸດທ້າຍ

ສະຫຼຸບແລ້ວ, ໃນຂະນະທີ່ທັງ PCR ແລະ PCR ໃນເວລາຈິງແມ່ນອີງໃສ່ຫຼັກການດຽວກັນຂອງວົງຈອນຄວາມຮ້ອນ, ພວກເຂົາໃຫ້ບໍລິການ niches ທີ່ແຕກຕ່າງກັນພາຍໃນຊຸມຊົນວິທະຍາສາດ - ອັນຫນຶ່ງເປັນພື້ນຖານທີ່ມີຄຸນນະພາບທີ່ເຂັ້ມແຂງແລະອີກອັນຫນຶ່ງເປັນພະລັງງານປະລິມານທີ່ມີຄວາມແມ່ນຍໍາສູງ.

ການວິວັດທະນາການຂອງ ເຄື່ອງ PCR ໄດ້ເຊື່ອມຕໍ່ຊ່ອງຫວ່າງລະຫວ່າງການຄົ້ນຄວ້າທາງພັນທຸກໍາຂັ້ນພື້ນຖານແລະການວິນິດໄສທາງດ້ານຄລີນິກຢ່າງໄວວາ. PCR ແບບດັ້ງເດີມຍັງຄົງເປັນເຄື່ອງມືທີ່ຂາດບໍ່ໄດ້ສໍາລັບຄວາມງ່າຍດາຍແລະລາຄາທີ່ເຫມາະສົມຂອງມັນ, ເຮັດໃຫ້ມັນເປັນກະດູກສັນຫຼັງຂອງການກໍານົດພັນທຸກໍາແລະ cloning. ໃນຂະນະດຽວກັນ, PCR ໃນເວລາຈິງໄດ້ກໍານົດມາດຕະຖານຄວາມໄວແລະຄວາມອ່ອນໄຫວຄືນໃຫມ່, ອະນຸຍາດໃຫ້ການກໍານົດປະລິມານທັນທີທັນໃດຂອງສານພັນທຸກໍາທີ່ມີຄວາມສໍາຄັນໃນຂະແຫນງການແພດແລະສິ່ງແວດລ້ອມທີ່ເລັ່ງດ່ວນໃນປະຈຸບັນ.

ໃນຂະນະທີ່ເຕັກໂນໂລຢີສືບຕໍ່ກ້າວຫນ້າ, ຊ່ອງຫວ່າງຂອງຄ່າໃຊ້ຈ່າຍໃນອຸປະກອນແມ່ນຄ່ອຍໆແຄບລົງ, ເຮັດໃຫ້ຄວາມຊັບຊ້ອນ ເຕັກໂນໂລຊີ ເຄື່ອງ PCR ສາມາດເຂົ້າເຖິງຫ້ອງທົດລອງທຸກຂະຫນາດ. ບໍ່ວ່າທ່ານຈະເລືອກວິທີການໃດ, ການຮັບປະກັນວ່າທ່ານມີອຸປະກອນທີ່ມີຄຸນນະພາບສູງ, ເຊື່ອຖືໄດ້ແມ່ນປັດໃຈສໍາຄັນທີ່ສຸດໃນການບັນລຸຜົນທີ່ສາມາດແຜ່ພັນໄດ້ແລະຖືກຕ້ອງ. ໂດຍການເຂົ້າໃຈຄວາມຕ້ອງການສະເພາະຂອງຄໍາຮ້ອງສະຫມັກຂອງທ່ານ - ບໍ່ວ່າຈະເປັນການຢັ້ງຢືນງ່າຍດາຍຫຼືປະລິມານທີ່ຊັບຊ້ອນ - ທ່ານສາມາດລົງທຶນໃນເຕັກໂນໂລຢີທີ່ຈະສະຫນັບສະຫນູນການຂະຫຍາຍຕົວຂອງຫ້ອງທົດລອງແລະການປະກອບສ່ວນທາງວິທະຍາສາດທີ່ດີທີ່ສຸດສໍາລັບປີຂ້າງຫນ້າ.