Ko te miihini PCR he taputapu taiwhanga e whakamahi ana i te paihikara paihikara tika hei whakangawari i te Tauhohenga Chain Polymerase, e taea ai te whakakaha tere o nga raupapa DNA, RNA ranei mo te tātari. Ma te whakaaunoa i nga waahanga whakamahana me te whakamahana e hiahiatia ana mo te whakaheke, te whakahiato, me te toronga, ka whakaratohia e te miihini PCR hou te rite me te tere e tika ana mo nga tono haumanu me te rangahau.
Ko te maarama ki te hangarau o enei miihini he mea nui mo nga kaiwhakahaere taiwhanga, kairangahau, me nga tohunga rongoa e whai ana ki te arotau i o raatau rerenga mahi tātari. Mai i nga uauatanga o nga huānga whakamahana Peltier ki nga taputapu matatau o nga punaha wa-tuuturu, he uaua, he whakahihiri hoki te miihini i muri i te whakakaha DNA. Ko tenei tuhinga e whakarato ana i te tuhura matawhānui o te hangarau PCR, ona waahanga miihini, me ona momo tono i roto i te umanga rongoa o te ao.
Tirohanga Hanganga Tuhinga
| Wāhanga |
Whakarāpopototanga |
| Me pehea te Mahi a te Miihini PCR |
He whakamaarama mo te toru-taahiraa i te tukanga paihikara waiariki (denaturation, annealing, me te toronga) e taea ai te tipu DNA taupū. |
| Nga Waahanga Matua o te Hangarau PCR |
He wehenga hangarau o nga poraka whakamahana, nga huānga Peltier, me nga pūoko e whakarite ana i te riterite me te tika o te waiariki. |
| Nga Momo Miihini PCR me o raatau Whakamahinga |
He whakataurite i waenga i nga kaieke hiko waiariki, nga punaha Waa-Tuturu (qPCR), me nga hangarau Digital PCR (dPCR). |
| Te Hiranga o te Whakariterite Ngaaariki |
Ko te tātari he aha te riterite o te pāmahana puta noa i nga puna katoa te take tino nui mo nga hua taiwhanga pono-whakapaipai SEO. |
| Nga tono i roto i nga Taatauranga Hou |
Me pehea te whakamahi hangarau PCR i roto i nga whakamatautau mate hopuhopu, te oncology, me te taatai mate. |
| Nga Tohu Tiaki me te Arotautanga |
Ko nga mahi pai mo te whakatikatika me te pupuri i nga taputapu PCR hei whakarite i te tika me te mahi mo te wa roa. |
Me pehea te Mahi a te Miihini PCR
Ko te mahi taketake o te miihini PCR ko te eke paihikara i roto i nga rohe wera motuhake e toru hei whakaahuru i te DNA denaturation, te whakamaarama tuatahi, me te toronga enzymatic, ka puta te tukuruatanga o nga rawa ira i whaaia.
Kei te ngakau o te tukanga ko te huringa waiariki. I te wahanga tuatahi, te denaturation, ka whakamahana te miihini PCR i te ranunga tauhohenga ki te 94 ki te 98 nga nekehanga Celsius. Ko tenei pāmahana teitei ka pakaru i nga here hauwai i waenga i nga whenu e rua o te DNA helix takirua, ka puta mai nga tauira DNA kotahi-paetahi. He mea nui i tenei wa, na te mea karekau te wera ka kore e wehe i nga whenu, ma te nui o te wera ka pakaru te whaariki polymerase pumau.
Ko te waahanga tuarua ko te whakaene, ka whakahekehia te pāmahana ki waenga i te 50 me te 65 nga nekehanga Celsius. Ma tenei ka taea e nga raupapa DNA poto e kiia nei ko nga mea tuatahi ki te here ki o raatau raupapa taapiri i runga i nga tauira DNA whenu kotahi. Ko te pāmahana tika e whakawhirinaki ana ki te pāmahana whakarewa o nga papa tuatahi i whakamahia. kounga teitei te tae me te whakau i tenei pāmahana motuhake kia tere ai te herenga kore-motuhake, ka puta he hua kore tika, he 'haruru' ranei i roto i nga raraunga. miihini PCR Me taea e te
Ka mutu, ka puta te wahanga toronga, i te nuinga o te waa ki te 72 nga nekehanga Celsius. Koinei te pāmahana tino pai mo te DNA polymerase (te nuinga o te Taq polymerase) ki te whakahiato i tetahi whenu DNA hou ma te taapiri i nga nucleotides ki nga papa tuatahi. Ka hoki ano te huringa, ka ruarua te maha o nga kape DNA i ia wa. Kia pai ake te mohio ki te haumi moni e hiahiatia ana mo tenei hangarau, ka taea e koe te torotoro i nga korero mo He aha te Miihini PCR me ona utu hei arotake i te tahua e hiahiatia ana mo nga waahanga mahi teitei.
Ko nga Hangarau o te Tipu Tautanga
Porohita 1: 2 kape
Porohita 10: 1,024 kape
Porohita 30: Neke atu i te 1 piriona kape
Nga Waahanga Matua o te Hangarau PCR
Ko te hiranga hangarau o te miihini PCR e whakawhirinaki ana ki ona taputapu o roto, ko nga huānga whakawera Peltier, te paraka waiariki hiriwa, konumohe ranei, me te punaha whakahaere maamaa e whakahaere ana i nga nekehanga tere o te pāmahana.
Ko te waahanga tino nui ko te huānga Peltier, he papu wera kaha-a-te-te-te-te-a-roto e whakawhiti ana i te wera mai i tetahi taha o te taputapu ki tetahi taha ki te rōnaki pāmahana. Ma tenei ka taea te whakamahana me te whakamatao mai i te puna kotahi, ka taea e te miihini PCR te huri i te mahana i roto i nga hēkona. Ko te tere e puta ai enei whakawhitinga—mohiotia ko te 'reeti ramp'—te whakatau tika i te kaha me te puta o te taiwhanga. He maha nga wa kei roto i nga miihini teitei nga poraka hiriwa whakakikoruatia ki te koura hei whakanui ake i te kawe wera.
Ko nga pūoko me te microprocessors te 'roro' o te taputapu. Ko enei waahanga ka aro turuki i te pāmahana paraka i roto i te waa-a-waa, ka whakatika i te mana ki nga huānga Peltier hei aukati i te paheketanga o te pāmahana ki raro ranei. Ka whakamahia e nga punaha o naianei nga pukoro maha puta noa i te poraka ki te whakarite kia pai te wheako o ia tauira ki nga ahuatanga o te waiariki. Mo nga whakaurunga e rapu ana ki te whakapai ake i o raatau taputapu, ma te whiriwhiri i te pono Ko te kaiwhakarato miihini PCR e whakarite kia uru atu ki nga hangarau puoro hou me te miihini pakari.
Ko te taupoki whakamahana tetahi atu waahanga nui engari ka warewarehia. Ma te pupuri i te taupoki i te pāmahana paku teitei ake i te pāmahana poraka mōrahi (te nuinga o te 105 nga nekehanga Celsius), ka aukati te miihini i te whakaetonga me te whakapoapoa o te ranunga tauhohenga i runga i nga potae ngongo. Ma tenei ka whakarite kia noho tonu nga kuhanga o nga reagents puta noa i te 30 ki te 40 huringa, he mea nui mo te toenga matū o te tauhohenga.
Nga waahanga taputapu matua
Poraka Weariki: E 96, 384 ranei nga puna.
Ramp Ramp: Te tere o te huringa pāmahana (i whanganga ki te °C/s).
Tika: Kia pehea te tata o te paemahana poraka ki te tautuhinga.
Whakariterite: Te riterite o te pāmahana puta noa i nga puna katoa.
Nga Momo Miihini PCR me o raatau Whakamahinga
Ko te koiora irapoi hou e whakamahi ana i nga waahanga tuatahi e toru o te hangarau PCR: Rōnaki PCR mo te arotautanga, PCR Wā-Tuturu (qPCR) mo te ine, me te PCR Mamati mo te tino tika i roto i te kitenga allele onge.
Ko nga Paihikara Ngawha Paerewa te momo e whakamahia ana i roto i te rangahau me te maatauranga. I hangaia enei miihini mo te PCR 'mutunga-mutunga', te tikanga ka tātarihia nga hua i muri i te mutunga o nga huringa, ko te tikanga ma te hiko hiko. Ko te rereketanga o tenei ko te miihini PCR Gradient , e taea ai e te kaiwhakamahi te whakarite i nga pāmahana rereke puta noa i te poraka i te waa oma kotahi. He tino whai hua tenei mo te whakatau i te pāmahana whakahiato tino pai mo nga kaimatai hou, ka tiakina nga haora o te whakamatautau-me-hapa.
Ko nga miihini PCR Wa-Tuturu (qPCR) e tohu ana i te peke hangarau nui. Kei roto i enei taputapu he punaha whatu whakauru (nga taiaho, nga rama rama me nga kaitirotiro) ki te aro turuki i te rere o nga tauira DNA i te wa o te whakakaha. Ma tenei ka taea te tātaritanga ' ine ', ka taea e nga kairangahau te whakatau i te nui o te raupapa DNA motuhake kei roto i te tauira taketake. Ko tenei hangarau te paerewa koura mo te whakamatautau i te uta viral me nga rangahau whakaaturanga ira. Te maarama ki te Ko te utu me nga whakaritenga o nga waeine PCR he mea nui i te wa e whakatau ana i waenga i te kaihurihuri paerewa me te punaha qPCR matatau.
Ko te PCR Mamati (dPCR) te kukuwhatanga hou, e tuku ana i te inenga tino kore e hiahiatia he pihinga paerewa. Ka wehewehea te tauira ki roto i nga mano tini rūrūtia iti, ka puta te tauhohenga PCR ki ia waahanga. Ma te tatau i te maha o nga rūrūtia 'pai' ki te 'kino' ka tukuna e te miihini he tatau tino tika o nga ngota ngota DNA. He tino pai tenei mo te kite i nga huringa onge i roto i nga koiora wai, i nga tauira taiao ranei kei reira te DNA whaainga i roto i nga tino iti.
Whakatauritenga o Hangarau PCR
| Āhuahira |
PCR Paerewa |
PCR Wā-tūturu (qPCR) |
PCR Mamati (dPCR) |
| Te rapunga |
Whakamutunga |
Wā-tūturu |
Ira-mutunga (Mutu) |
| Te ine |
Te kounga |
Whanaunga/Ine |
Tino |
| Te tairongo |
Whakaōrite |
Teitei |
Tino-Teitei |
| Te matatini |
Iti |
Whakaōrite |
Teitei |
Te Hiranga o te Whakariterite Ngaaariki
Ko te riterite ngaaariki e pa ana ki te riterite o te pāmahana puta noa i nga puna katoa o te paraka PCR, he mea tino nui kia kaha ake nga tauira katoa i roto i te pereti 96-puna kia rite tonu te reiti ka puta nga hua ka taea te whakaputa.
Mena he 0.5 nga nekehanga Celsius te whakamatao o tetahi kokonga o te poraka waiariki i te pokapū, karekau pea te DNA o roto o aua puna e tino whakahekehia, ka herea ranei nga papa tuatahi. Ka puta tenei ki te 'rereketanga pai-ki-pai,' ka taea te whakakino i te katoa o te whakamatautau, te kino atu ranei, ka arahi ki te kino kino i roto i te waahi whakamatautau haumanu. Ko nga kaihanga o nga tauira -kounga teitei miihini PCR e whakapau kaha ana ki te miihini tika me te whakamahana rohe-maha hei whakaiti i enei raru me te whakarite i te ahua o te taha ki te taha.
Ka whakamahia nga raupaparorohiko raupaparorohiko hei utu mo te 'painga taha', kei reira nga puna i te paenga o te poraka ka tere ake te wera atu i era o waenganui. Ma te whakahaere takitahi i nga rohe Peltier rereke, ka taea e te miihini te pupuhi atu i te wera ki nga taha ki te pupuri i tetahi tohu waiariki papatahi. Ina rangahau taputapu, he pai ki te titiro ki a Putumōhio miihini PCR kounga teitei hei whakatairite i te whakahaerenga o nga momo rama ki te whakahaere waiariki me te whakatikatika poraka.
Ko te whakahoki ano te kohatu kokonga o te putaiao. Ahakoa ka mahia he whakamatautau ki Ranana, ki Shanghai ranei, miihini PCR . me rite te mahi a te Koia te take me whakahau nga paerewa o te ao me te whakatikatika auau mo nga taiwhanga haumanu. Ko te miihini me te kore o te riterite ka whakaputa i nga uara taupatupatu 'Ct' (paepae huringa) i roto i te qPCR, na reira ka kore e taea te tatau tika i nga uta huaketo, tohu ira ranei puta noa i nga oma rereke, taiwhanga ranei.
Nga take e pa ana ki te kotahitanga
Rauemi Poraka: He pai ake te hiriwa ki te konumohe mo te tohatoha wera.
Kounga Peltier: Ko nga Peltiers teitei he roa ake te ora me te whakamahana rite tonu.
Te Whakanohonga Pūoko: He pai ake nga urupare a nga pukoro maha mo te kopae mana.
Nga tono i roto i nga Taatauranga Hou
Ko te whakamahinga o te hangarau PCR puta noa i te tautuhi mate hopuhopu, te oncology mo te tohu tohu mate pukupuku, me te putaiao matapae, ka whakamahia hei hanga i nga korero DNA mai i nga tauira koiora iti.
I roto i te ao o nga mate hopuhopu, miihini PCR hei taputapu tino nui. kua riro te Ka taea te kite i nga pathogens penei i te HIV, te Hepatitis, me nga wheori rewharewha he nui ake te tairongo me te tere atu i nga tikanga tikanga tuku iho. Na te mea ka taea e te miihini te kite tika i te waahi o te ira momo huaketo, ka taea e ia te tautuhi i tetahi mate i mua i te whakawhanaketanga o te manawanui i te urupare mate, i nga tohu ranei, ka taea te wawaotanga o mua me te pai ake o te whakahaere hauora a te iwi.
Ko te Oncology tetahi atu mara e whai hua nui ana i tenei hangarau. Ka whakamahia te PCR ki te kite i nga rereketanga ira ira e pa ana ki etahi momo mate pukupuku. Ma tenei ka taea te 'rongoa whaiaro,' ka taea e nga taakuta te whiriwhiri i te rongoa tino whai hua i runga i te tohu ira o te puku. Mo te hunga e hiahia ana ki te mahi a te hangarau ki te tiaki hauora, panui mo te utu me te whaipainga o nga punaha PCR e whakaatu ana me pehea te whakataurite a nga hohipera i nga hangarau hou me nga tahua whakahaere.
Kei te whakawhirinaki te pūtaiao forensic ki te PCR ki te whakanui ake i te DNA mai i nga tirohanga kino, penei i te makawe kotahi, i te pata toto ranei. Ma te aro ki nga waahi motuhake o te ira tangata e rerekee ana i waenga i nga tangata takitahi (STR), ka taea e nga kaiputaiao tuukino te hanga i tetahi tapumati DNA ahurei. Na tenei hangarau i huri i te punaha ture, e whakaatu ana i nga taunakitanga kaha mo nga whakawhiu me te whakakorenga o te hunga i whakapaea he.
Nga Rangai Tono Nui
Nga Taatauranga Haumanu: Te whakamatautau pathogen me te tirotiro i te whanautanga.
Haumaru Kai: Te kimi i nga GMO me nga tukumate kawe kai penei i a Salmonella.
Pūtaiao Taiao: Te aro turuki i nga taupori moroiti i te oneone, i te wai ranei.
Rangahau: Ko te whakakao, te whakaraupapa, me te tātari ira.
Nga Tohu Tiaki me te Arotautanga
Hei whakarite i te roa me te tika o te miihini PCR, me whakatinana nga whare taiwhanga i nga tikanga tiaki tino, tae atu ki te horoi paraka i nga wa katoa, te whakatikatika i te taupoki, me te whakamana i te waiariki ngaio.
Ko te poke te hoariri nui o te PCR. Ahakoa ko te ngota ngota DNA kotahi mai i te oma o mua ka taea te whakanui ake, ka puta he hua teka. No reira, me horoi i nga wa katoa te poraka waiariki o te miihini PCR ki nga rongoatanga tango DNA motuhake, 10% ranei te hātea ka whai i te waihano. He mea nui ano hoki kia tika te hiri o nga ngongo kia kore ai e rere te tauira ki roto i nga puna, ka pirau te mata o te paraka me te whakaporearea i te whakawhiti wera.
He mea nui ano te whakatikatika i nga wa katoa. Ka roa te wa, ka heke te ahua o nga huānga Peltier, ka piki ake te tere o te reiti, ka heke ranei te riterite o te waiariki. Ka whakamahi nga ratonga whakatikatika ngaio i te punaha 'multiprobe' ki te ine i te mahana o etahi puna i te wa kotahi i te wa e oma whakahi ana. Ma tenei ka whakapumau kei te mahi tonu te miihini i roto i nga whakaritenga a te kaiwhakanao. Mo nga taiwhanga e rapu ana i nga taputapu pakari me nga korero tiaki ngawari, korero ki tetahi tohunga Ka taea e te kaiwhakarato taputapu PCR te awhina ki te kowhiri i nga tauira i hangaia mo te mahi taumaha.
Kaua e warewarehia nga whakahou rorohiko. He maha nga wa ka tukuna e nga Kaihanga nga whakahoutanga firmware hei whakapai ake i nga huringa whakahaere i te pāmahana me te taapiri i nga ahuatanga hou ki te atanga kaiwhakamahi. Ko te pupuri i nga rorohiko o te miihini ki te waa e mohio ana kei te whai hua koe i nga arotautanga hou mo te whakahaere waiariki. I tua atu, me whakamahi i nga wa katoa nga taonga PCR kounga teitei (nga ngongo me nga pereti), i te mea ko nga kirihou angiangi-taiepa he mea hanga motuhake kia tere te whakawhiti o te wera mai i te poraka ki te ranunga tauhohenga.
Rarangi Arowhai tiaki
Ia ra: Horoia te taha o waho ka tirohia te taupoki kua wera.
Ia wiki: Tirotirohia nga puna mo te para, te pakaru ranei; horoia te poraka.
Ia Marama: Whakahaerehia he whakamatautau tātari whaiaro mena kei te waatea i roto i te rorohiko.
Ia tau: Te whakamanatanga waiariki ngaio me te whakatikatika.
Whakamutunga
Ko te hangarau o te miihini PCR he tino karaehe i roto i te miihini tika me te matū ngota. Na roto i te whakarato i tetahi taiao whakahaere mo te whakanui ake i te DNA, kua whakatuwherahia e enei taputapu nga mea ngaro o te waehere ira me te whakarato i nga taputapu e tika ana hei whawhai i nga mate pukupuku o te ao, te rongoa i te mate pukupuku, me te whakaoti hara. I a tatou e anga atu ana ki nga punaha whakauru me nga punaha matihiko, ko nga maataapono matua o te paihikara waiariki e mau tonu ana.
Mo nga taiwhanga me nga whare hauora, ko te whiriwhiri i te hangarau PCR tika he toenga o te tere, te tika, me te whai hua-utu. Ahakoa he paihikara waiariki taketake mo nga kaupapa maatauranga, he punaha wa-tuituru ranei mo nga tātaritanga tino nui, ko te maarama ki nga miihini kei muri o te miihini te mahi tuatahi ki te whakatutuki i nga hua pono me te whai hua. Ko te wa kei te heke mai o te hangarau PCR e kii ana i nga hua tere ake, te kawe nui ake, me te aro nui ake, me te haere tonu o tana mahi hei kohatu kokonga o te ahunga whakamua putaiao.
