የፖሊሜራይዜሽን ሰንሰለት ምላሽ (PCR) ሂደት ደረጃዎች

PCR በመባል የሚታወቀው የPolymerase Chain Reaction በሞለኪውላር ባዮሎጂ ታሪክ ውስጥ በጣም ጠቃሚ ከሆኑት የቴክኖሎጂ ግኝቶች አንዱን ይወክላል። እ.ኤ.አ. በ1980ዎቹ የተገነባው ይህ ዘዴ ከልዩ የላቦራቶሪ አሰራር ወደ የህክምና ምርመራ ፣የፎረንሲክ ሳይንስ እና የጄኔቲክ ምርምር ወደሚያገለግል መሰረታዊ መሳሪያ ተሸጋግሯል። ሳይንቲስቶች ትንሽ የዲ ኤን ኤ ናሙና ወስደው በሚሊዮኖች የሚቆጠሩ ቅጂዎችን እንዲያሳድጉ በመፍቀድ PCR ጂኖችን በዝርዝር ለማጥናት፣ በሽታ አምጪ ተህዋሲያን እጅግ በጣም ትክክለኛነትን ለመለየት እና ቀደም ሲል በመደበኛ የትንታኔ ዘዴዎች የማይታዩ የጄኔቲክ ምልክቶችን ለመለየት አስችሏል።

የ PCR ሂደት በልዩ PCR ማሽን እና በሙቀት-የተረጋጋ የዲ ኤን ኤ ፖሊመሬዜዝ የታገዘ የሙቀት ለውጥ ዑደት ውስጥ የአንድ የተወሰነ ዲኤንኤ ክፍል ብዙ ቅጂዎችን ለመስራት የሚያገለግል የላብራቶሪ ቴክኒክ ነው።

የ PCR ሂደትን ውስብስብነት መረዳት በምርመራ መሳሪያዎች ውስጥ ለሚሳተፉ የላቦራቶሪ ባለሙያዎች, የሕክምና ተመራማሪዎች እና የኢንዱስትሪ አምራቾች አስፈላጊ ነው. ፈጣን እና ትክክለኛ የሞለኪውላር ሙከራ ፍላጎት በአለምአቀፍ ደረጃ እያደገ ሲሄድ ፣የእሱ አስተማማኝነት PCR ማሽን ለስኬታማ የላብራቶሪ ውጤቶች የማዕዘን ድንጋይ ይሆናል። ይህ ጽሑፍ ከፍተኛ ጥራት ያለው የዲኤንኤ ማጉላት እና ጠንካራ የሙከራ ውጤቶችን ለማረጋገጥ የ PCR ሂደትን ደረጃዎች, ሙቀቶች እና ሜካኒካል መስፈርቶች አጠቃላይ መመሪያ ይሰጣል.

የአንቀጽ ማጠቃለያ ሰንጠረዥ

ክፍል	ማጠቃለያ
PCR ምንድን ነው?	PCR ለተለያዩ የታችኛው ተፋሰስ አፕሊኬሽኖች የተወሰኑ የዲኤንኤ ቅደም ተከተሎችን በስፋት ለማጉላት የሚያገለግል ሞለኪውላር ባዮሎጂ ዘዴ ነው።
ለ PCR ምን ያስፈልጋል?	ስኬታማ PCR አብነት ዲኤንኤ፣ ፕሪመርሮች፣ ኑክሊዮታይድ፣ የተረጋጋ የዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬሴይ እና ከፍተኛ ትክክለኛ የሙቀት ዑደት ይፈልጋል።
የ PCR 4 ደረጃዎች ምንድ ናቸው?	ሂደቱ በእያንዳንዱ ዑደት ውስጥ የዲኤንኤ ይዘትን በእጥፍ ለመጨመር የመነሻ፣ የመደንዘዝ፣ የመደንዘዝ እና የማስፋት ምክንያታዊ ቅደም ተከተል ይከተላል።
የ PCR ማሽን ደረጃዎች ምንድ ናቸው?	መሳሪያዎቹ ትክክለኛ የሙቀት ሽግግሮችን በራስ-ሰር ያዘጋጃሉ, ይህም ባዮኬሚካላዊ ምላሾች በተፈለገው የጊዜ ክፍተት ውስጥ መከሰታቸውን ያረጋግጣል.
ለዲንቸር ደረጃ ጥቅም ላይ የሚውለው የሙቀት መጠን ምን ያህል ነው?	ከፍተኛ ሙቀት፣በተለምዶ ከ94°ሴ እስከ 98°ሴ፣የሃይድሮጂን ቦንድ ለመስበር እና ባለ ሁለት ገመድ ዲ ኤን ኤ ለመለየት ጥቅም ላይ ይውላል።
በመከር ወቅት ምን ይሆናል?	በዚህ ደረጃ፣ ፕሪመርሮች በነጠላ ገመድ ባለው ዲ ኤን ኤ ላይ ከተጨማሪ ዒላማ ቅደም ተከተላቸው ጋር እንዲጣመሩ ለማድረግ የሙቀት መጠኑ ይቀንሳል።
ለኤክስቴንሽን ደረጃ ጥቅም ላይ የሚውለው የሙቀት መጠን ምን ያህል ነው?	ይህ እርምጃ ብዙውን ጊዜ በ 72 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ይከሰታል, ለ Taq polymerase አዲስ የዲ ኤን ኤ ገመዱን ለማዋሃድ ጥሩው ሙቀት.
የ PCR የሙቀት ፍሰት ምንድነው?	ፍሰቱ የሚፈለገው ትኩረት እስኪደርስ ድረስ የሚደጋገም ከፍተኛ፣ ዝቅተኛ እና መካከለኛ የሙቀት መጠን ያለው ፈጣን የብስክሌት ዘይቤን ያካትታል።

PCR ምንድን ነው?

PCR ወይም Polymerase Chain Reaction ከአንድ የተወሰነ የዲኤንኤ ናሙና በሚሊዮን እስከ ቢሊየን የሚቆጠር ቅጂዎችን በፍጥነት ለማምረት የተነደፈ የለውጥ ሞለኪውላር ባዮሎጂ ዘዴ ነው።

በመሰረቱ፣ PCR እንደ 'ባዮሎጂካል ፎቶኮፒየር' ሆኖ ይሰራል። ከመፈልሰፉ በፊት ዲኤንኤን ማጉላት ዲ ኤን ኤ ወደ ባክቴሪያ እንዲቀላቀል የሚያደርግ አዝጋሚ እና ከባድ ሂደት ነው። ከመምጣቱ ጋር PCR ማሽን , ተመራማሪዎች አሁን የተወሰነውን ጂን ወይም የጂኖም ክፍል ለይተው በጥቂት ሰዓታት ውስጥ ማጉላት ይችላሉ. ይህ ችሎታ በጣም አስፈላጊ ነው ምክንያቱም አብዛኛዎቹ ባዮኬሚካላዊ ትንታኔዎች ሊለካ የሚችል ምልክት ለማምጣት ከፍተኛ መጠን ያለው ዲ ኤን ኤ ያስፈልጋቸዋል እና የተፈጥሮ ናሙናዎች ብዙውን ጊዜ የመከታተያ መጠን ብቻ ይሰጣሉ።

የዚህ ቴክኖሎጂ ሁለገብነት በተለያዩ ኢንዱስትሪዎች ውስጥ በተለያዩ አፕሊኬሽኖች ውስጥ ተንጸባርቋል። በክሊኒካዊ መቼቶች፣ እንደ የኮቪድ-19 ወይም የኤችአይቪ ምርመራ ያሉ የቫይረስ ጭነቶችን ለመለየት ይጠቅማል። በፎረንሲክስ ውስጥ፣ መርማሪዎች በጥቃቅን ከሚታዩ የባዮሎጂካል ቁስ ናሙናዎች ግለሰቦችን እንዲለዩ ያስችላቸዋል። በኢንዱስትሪ ዘርፍ PCR የምግብ ምርቶችን ንፅህና እና በጄኔቲክ የተሻሻሉ ፍጥረታትን መለየት ያረጋግጣል. የሚለውን መረዳት የ PCR ቴክኖሎጂ መርሆዎች እና ወጪዎች የምርመራ ችሎታቸውን ለማሻሻል ለሚፈልጉ ላቦራቶሪዎች ወሳኝ ናቸው.

ለ PCR ምን ያስፈልጋል?

የተሳካ የ PCR ምላሽ አምስት ዋና ዋና ክፍሎችን ይፈልጋል፡ የዲኤንኤ አብነት፣ የተወሰኑ ፕሪመርሮች፣ ዲኦክሲኑክሊዮታይድ ትሪፎስፌትስ (ዲኤንቲፒ)፣ ሙቀት-የተረጋጋ የዲኤንኤ ፖሊመሬሴ (እንደ ታክ) እና ልዩ ቋት መፍትሄ።

የዲኤንኤ አብነት ለመቅዳት እንደ ዋናው ንድፍ ሆኖ ያገለግላል። ፕሪመርስ ከዒላማው ቅደም ተከተል መጀመሪያ እና መጨረሻ ጋር ለማዛመድ በብጁ የተነደፉ አጫጭር፣ ሠራሽ ዲ ኤን ኤ ቁርጥራጮች ናቸው። እነዚህ ከሌሉ የዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬዝ አዲሱን ክር መገንባት የት እንደሚጀመር አያውቅም። ዲኤንቲፒ (ኤ፣ ቲ፣ሲ እና ጂ) ኢንዛይሙ አዲሱን የዲኤንኤ ሰንሰለት ለመገንባት የሚጠቀምባቸው ጥሬ የግንባታ ብሎኮች ናቸው።

ምላሹ የሚከሰትበት አካባቢም እንዲሁ አስፈላጊ ነው። ቋቱ የተረጋጋ ኬሚካላዊ አካባቢን ይሰጣል፣ በተለይም ፒኤች እና የማግኒዚየም ions ክምችት ላይ በማተኮር ለዲኤንኤ ፖሊሜሬሴ ኢንዛይም አስፈላጊ ተባባሪዎች ናቸው። በመጨረሻም, የምላሹን አካላዊ አፈፃፀም ከፍተኛ አፈፃፀም ያለው የሙቀት ዑደት ያስፈልገዋል, ብዙውን ጊዜ እንደ PCR ማሽን ይባላል , ይህም እያንዳንዱን የምላሽ ደረጃ ለመቀስቀስ የሚያስፈልገውን ፈጣን የሙቀት ለውጥ በትክክል ይቆጣጠራል.

የ PCR ድብልቅ ቁልፍ አካላት

1. አብነት ዲ ኤን ኤ ፡ የዒላማውን ቅደም ተከተል የያዘ ናሙና።

2. ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ ፡ ብዙ ጊዜ ታክ ፖሊሜሬሴ፣ እሱም በከፍተኛ ሙቀት ውስጥ ንቁ ሆኖ ይቆያል።

3. ፕሪመርስ ፡ የማጉላት ድንበሮችን የሚወስኑ ወደፊት እና የተገላቢጦሽ ክሮች።

4. dNTPs ፡ አራቱ ኑክሊዮታይድ መሠረቶች ለቅጂው 'ቀለም' ሆነው ያገለግላሉ።

5. ቋት እና ionዎች ፡ የኢንዛይም ቅልጥፍናን እና መረጋጋትን ይጠብቃል።

የ PCR 4 ደረጃዎች ምንድ ናቸው?

የ PCR ሂደት አራት ዋና የተግባር ደረጃዎችን ያቀፈ ነው፡- ጅማሬ፣ ዲናቹሬሽን፣ ማደንዘዣ እና ማራዘሚያ (እንዲሁም ኤሎንግሽን በመባልም ይታወቃል)።

የመጀመሪያው ደረጃ, Initialization, የዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬዝ ሙሉ በሙሉ እንዲሠራ እና ማንኛውም ብክለት እንዲወገድ ለማድረግ የምላሽ ክፍሉ ወደ ከፍተኛ ሙቀት የሚሞቅበት የአንድ ጊዜ ክስተት ነው. ከዚህ በኋላ, የዲንቴሬሽን ዑደት ይጀምራል, እሱም ባለ ሁለት መስመር ዲ ኤን ኤ ተለያይቷል. ከዚህ ቀጥሎ Annealing ተከትሎ ነው፣ ፕሪመርሮቹ ኢላማቸውን የሚያገኙበት፣ እና በመጨረሻም ኤክስቴንሽን፣ አዲሱ ዲ ኤን ኤ የተዋሃደበት። ይህ የሶስት-ደረጃ ዑደት (Denaturation, Annealing, Extension) ከ 25 እስከ 40 ጊዜ ይደጋገማል.

በእያንዳንዱ የተሳካ ዑደት የዲኤንኤው መጠን በእጥፍ ስለሚጨምር እድገቱ በጣም ሰፊ ነው. ለምሳሌ፣ ከ30 ዑደቶች በኋላ፣ አንድ ነጠላ የዲ ኤን ኤ ሞለኪውል ከአንድ ቢሊዮን በላይ ቅጂዎች ሊቀየር ይችላል። ይህ ውጤታማነት የሚያመጣው ነው ዘመናዊ የላቦራቶሪ የሙቀት ዑደትዎች ለዘመናዊ ሳይንስ በጣም አስፈላጊ ናቸው. ከፍተኛ-ፍጥነት ያለው ማሞቂያ እና ማቀዝቀዝ ከፍተኛ ጥራት ባለው PCR ማሽን ውስጥ ካልተገኙ , ሂደቱ በከፍተኛ የምርመራ አካባቢዎች ውስጥ ለተግባራዊ አጠቃቀም በጣም ቀርፋፋ ይሆናል.

የ PCR ማሽን ደረጃዎች ምንድ ናቸው?

የ PCR ማሽን ደረጃዎች የሙቀት መጠንን በራስ-ሰር ማሽከርከርን፣ የሙቀት ብሎክን በትክክል በኤሌክትሮኒካዊ ቁጥጥር፣ የከፍታ ፍጥነትን መቆጣጠር፣ የመቆያ ጊዜ እና የመጨረሻ ማቀዝቀዣን ያካትታሉ።

የ PCR ማሽን የሚሠራው የፔልቲየር ኤለመንቶችን በመጠቀም በፍጥነት ለማሞቅ እና የምላሽ ቱቦዎችን የሚይዝ የብረት ማገጃ ነው። ከማሽኑ እይታ አንጻር የ 'እርምጃዎች' በሙቀቶች መካከል ያለው የሽግግር ፍጥነት ' ራምፕ ' እና ማሽኑ የተወሰነ የሙቀት መጠን የሚቆይበት ጊዜ ነው ። ከፍተኛ ደረጃ ያላቸው ማሽኖች በሽግግር ወቅት የሚጠፋውን ጊዜ ለመቀነስ በጣም ፈጣን የፍጥነት ደረጃዎች እንዲኖራቸው ተደርገው የተሰሩ ናቸው፣ ይህም ልዩ ያልሆነ ትስስር ወይም የኢንዛይም መበላሸት አደጋን ይቀንሳል።

በማሽኑ ውስጥ ያለው ሶፍትዌር ተጠቃሚዎች ውስብስብ ፕሮቶኮሎችን እንዲያዘጋጁ ያስችላቸዋል። ይህ የመነሻውን ሙቀት መጨመር, የሶስቱ ዋና ደረጃዎች ተደጋጋሚ ቀለበቶች እና የመጨረሻው የማቆያ ደረጃ በቀዝቃዛ ሙቀት (አብዛኛውን ጊዜ 4 ° ሴ) ቴክኒሻኑ እስኪያወጣቸው ድረስ ናሙናዎቹን ለመጠበቅ. በ ላይ ያሉ ዘመናዊ አሃዛዊ መገናኛዎች PCR ማሽን ምላሹን በእውነተኛ ጊዜ ለመከታተል ያስችላሉ, ይህም የሙቀት መገለጫው ለከፍተኛው ዳግም መባዛት በተቀመጠው መሰረት በትክክል መከተሉን ያረጋግጣል.

ለዲንቸር ደረጃ ጥቅም ላይ የሚውለው የሙቀት መጠን ምን ያህል ነው?

የዲ ኤን ኤ ክሮች መካከል ያለውን የሃይድሮጅን ትስስር ለመስበር የዲኤንኤው ደረጃ በተለምዶ ከ94°C እስከ 98°C ያለውን የሙቀት መጠን ይጠቀማል።

በዚህ ከፍተኛ ሙቀት፣ የዲኤንኤው ባለ ሁለት ሄሊክስ መዋቅር ያልተረጋጋ ይሆናል። የአድኒን-ቲሚን እና የሳይቶሲን-ጉዋኒን ጥንዶች በአንድ ላይ የሚይዘው የሃይድሮጂን ቦንዶች ይቀልጣሉ፣ በዚህም ምክንያት ሁለት ገለልተኛ ነጠላ የዲ ኤን ኤ ክሮች አሉ። ይህ ለቀጣይ ደረጃዎች ወሳኝ ቅድመ ሁኔታ ነው, ምክንያቱም ፕሪመርሮች እና የዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬዜሽን ኢንዛይም ከአንድ-ክር አብነቶች ጋር ብቻ ሊገናኙ ይችላሉ. የሙቀት መጠኑ በጣም ዝቅተኛ ከሆነ ዲ ኤን ኤው ሙሉ በሙሉ አይለያይም, ይህም ወደ ያልተሳካ ወይም ውጤታማ ያልሆነ ማጉላት ያመጣል.

ይሁን እንጂ, ይህንን የሙቀት መጠን ጠብቆ ማቆየት እጅግ በጣም ጠንካራ የሆነ የዲ ኤን ኤ ፖሊመሬዜሽን ይጠይቃል. ለዚህም ነው ከሙቀት አፍቃሪ ባክቴሪያ ቴርሙስ አኳቲከስ ተነጥሎ የታክ ፖሊሜሬዝ ግኝት በጣም አብዮታዊ ነበር። መደበኛ ኢንዛይሞች በ95 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ይወድማሉ፣ ነገር ግን ታክ ተግባራዊ ሆኖ ይቆያል። ላቦራቶሪዎች ማረጋገጥ አለባቸው የ PCR ማሺናቸው በሁሉም ጉድጓዶች ላይ ወጥ የሆነ ማሞቂያ መስጠቱን 'ቀዝቃዛ ቦታዎችን' ለመከላከል ይህ ዋነኛው ባህሪ ነው. ከፍተኛ ጥራት ያለው ሞለኪውላር ባዮሎጂ መሳሪያዎች.

በ PCR የማረፊያ ደረጃ ወቅት ምን ይሆናል?

በማቅለሚያው ጊዜ የሙቀት መጠኑ ወደ 50 ° ሴ እና 65 ° ሴ ዝቅ ይላል ፣ ይህም የዲ ኤን ኤ ፕሪመርሮች ከተጨማሪ ቅደም ተከተላቸው ጋር በአንድ ገመድ ባለው የዲኤንኤ አብነቶች ላይ እንዲጣበቁ ያስችላቸዋል።

ይህ እርምጃ በጣም ሚስጥራዊነት ያለው የ PCR ሂደት አካል ነው ሊባል ይችላል። ጥቅም ላይ የሚውለው ልዩ የሙቀት መጠን ጥቅም ላይ በሚውሉት የፕሪሚየር ሙቀት መጠን (ቲኤም) ላይ ይወሰናል. የሙቀት መጠኑ በጣም ከፍ ያለ ከሆነ, ፕሪመርዎቹ ከአብነት ጋር አይጣመሩም. በጣም ዝቅተኛ ከሆነ ፕሪመሮቹ 'በከፊል' ተመሳሳይ ከሆኑ ቅደም ተከተሎች ጋር ሊተሳሰሩ ይችላሉ፣ ይህም ወደ ልዩ ያልሆነ ማጉላት እና የተዘበራረቀ ውጤት ያስከትላል። የ PCR ማሽን በከፍተኛ ደረጃ ትክክለኛነት (ብዙውን ጊዜ በ 0.1 ዲግሪ ሴንቲግሬድ ውስጥ) ይህንን የሙቀት መጠን መምታት መቻል አለበት.

የማጥቂያው ደረጃ የሚቆይበት ጊዜ ብዙውን ጊዜ ከ 20 እስከ 40 ሴኮንድ ነው. በዚህ አጭር መስኮት ውስጥ፣ ፕሪመርሮቹ የምላሹን ድብልቅ በሞለኪውላዊ እንቅስቃሴ ያስሱ እና ወደ ዒላማው ቦታ ይጎርፋሉ። ፕሪመርሮቹ አንዴ ከተሰረዙ በኋላ ለዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬዝ ኑክሊዮታይድ መጨመር እንዲጀምር መነሻ ነጥብ ይሰጣሉ። ይህ ትክክለኛ ቅንጅት የተወሰኑ የጄኔቲክ ሚውቴሽን ወይም በሽታ አምጪ ተህዋሲያን ውስብስብ ባዮሎጂካል ናሙና ውስጥ ለመለየት ያስችላል። በሙያዊ የምርመራ ማሽኖች ላይ የሚደረግ ኢንቨስትመንት . ለክሊኒካዊ ላቦራቶሪዎች ቅድሚያ የሚሰጠው

ለኤክስቴንሽን ደረጃ ጥቅም ላይ የሚውለው የሙቀት መጠን ምን ያህል ነው?

የኤክስቴንሽን ደረጃው በአጠቃላይ በ 72 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ይከናወናል, ይህም የሙቀት-የተረጋጋ ዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬዝ አዲሱን የዲ ኤን ኤ ገመድ ለማዋሃድ በጣም ጥሩው ተግባራዊ የሙቀት መጠን ነው.

በ 72 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ, የዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬዝ ኢንዛይም ከፍተኛው ውጤታማነት ላይ ነው. በፕሪመር ቦታ ይጀምራል እና በፕሪመር 3' ጫፍ ላይ dNTP ዎችን ማከል ይጀምራል፣ በአብነት ገመዱ ላይ ይጓዛል። ኢንዛይሙ አብነቱን 'ያነባል' እና ተጨማሪውን መሠረት በአዲሱ ፈትል ውስጥ ያስቀምጣል። ለምሳሌ አብነት አዴኒን ካለው፣ ፖሊሜሬዝ ቲሚን ይጨምራል። የዚህ ምላሽ ፍጥነት አስደናቂ ነው; Taq polymerase በደቂቃ ወደ 1,000 ቤዝ ጥንዶች መጨመር ይችላል።

የዚህ እርምጃ የጊዜ ርዝማኔ የሚወሰነው በሚገለበጥበት የዲ ኤን ኤ ክፍል ርዝመት ላይ ነው. የዒላማው ቅደም ተከተል 1,000 የመሠረት ጥንዶች ርዝመት ካለው፣ የማራዘሚያው ደረጃ ለአንድ ደቂቃ ሊቀናጅ ይችላል። ዒላማው አጭር ከሆነ አጠቃላይ የማስኬጃ ጊዜን ለመቆጠብ ጊዜውን መቀነስ ይቻላል. በዚህ ደረጃ ማድረግ የ PCR ማሽን ቋሚ 72°C እንዲቆይ ባለሙሉ ርዝመት የዲኤንኤ ገመዶችን ለማጠናቀቅ በጣም አስፈላጊ ነው።

የ PCR የሙቀት ፍሰት ምንድነው?

የ PCR የሙቀት ፍሰቱ የከፍተኛ ሙቀት ዲንታሬሽን፣ ዝቅተኛ የሙቀት መጠን ማደንዘዣ እና መካከለኛ የሙቀት ማራዘሚያ ተደጋጋሚ ዑደት ይከተላል፣ ይህም የ 'sawtooth' የሙቀት መገለጫ ይፈጥራል።

ይህ ፍሰት የተነደፈው የዲኤንኤ መጠን የጂኦሜትሪክ እድገትን ከፍ ለማድረግ ነው። በተለመደው ሩጫ ማሽኑ በ 95 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ይጀምራል ለ 2 ደቂቃዎች (የመጀመሪያው ዲናቹሬሽን) ከዚያም ወደ ዑደት ውስጥ ይገባል: 95 ° ሴ ለ 30 ሰከንድ, 55 ° ሴ ለ 30 ሰከንድ እና 72 ° ሴ ለ 60 ሰከንድ. ይህ ዑደት 30 ጊዜ ይደግማል። በመጨረሻም ማሽኑ እስከ 4° ሴ ድረስ ለማጠራቀሚያ ከመቀዝቀዙ በፊት ሁሉም ነጠላ-ክር ያለው ዲ ኤን ኤ ሙሉ በሙሉ በድርብ መያዙን ለማረጋገጥ በ 72°C ለ 5-10 ደቂቃዎች 'Final Extension' አለ።

የዚህ የሙቀት ፍሰት ትክክለኛነት የ PCR ምርትን ምርት እና ንፅህናን በቀጥታ ይጎዳል. ፍሰቱ የማይጣጣም ከሆነ ኢንዛይሙ እንቅስቃሴውን ሊያጣ ይችላል ወይም ፕሪመርሮቹ 'primer dimers' ሊፈጥሩ ይችላሉ, እነዚህም በመሠረቱ ምንም ፋይዳ የሌላቸው የአጸፋው ቅርሶች ናቸው. በዚህ ምክንያት የ PCR ማሽን መለኪያ እና የሙቀት መጠኑ ለየትኛውም የላቦራቶሪ ሞለኪውላር ምርመራ ወይም ምርምር በጣም አስፈላጊ ነገሮች ናቸው.

የሙቀት ፍሰት ማጠቃለያ ሰንጠረዥ

ደረጃ	የተለመደው የሙቀት መጠን	ዓላማ
ማስጀመር	94 ° ሴ - 96 ° ሴ	ኢንዛይም ያነቃቃል ፣ ውስብስብ ዲ ኤን ኤ ያስወግዳል።
ዲናትዩሽን	94 ° ሴ - 98 ° ሴ	ባለ ሁለት ገመድ ዲ ኤን ኤ ወደ ነጠላ ክሮች ይለያል።
ማቃለል	50 ° ሴ - 65 ° ሴ	ፕሪመር ወደ ኢላማ ቅደም ተከተሎች እንዲታሰር ይፈቅዳል።
ቅጥያ	72 ° ሴ	ዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬዝ አዲስ የዲ ኤን ኤ ክሮች ይፈጥራል።
የመጨረሻ ማቆያ	4 ° ሴ - 10 ° ሴ	የተጨመረው ምርት የአጭር ጊዜ ማከማቻ።

መደምደሚያ

የPolymerase Chain Reaction የባዮሎጂካል ሳይንሶች ገጽታ ላይ ለውጥ ያመጣ የሚያምር እና ኃይለኛ መሳሪያ ነው። የሳይንስ ሊቃውንት ጥንቃቄ የተሞላበት የጥርስ መቆረጥ፣ መሻር እና ማራዘሚያ እርምጃዎችን በመከተል በዲ ኤን ኤ ውስጥ የተያዙትን ሚስጥሮች በመግለጥ ለተወሳሰቡ የሕክምና እና የሕግ ጥያቄዎች መልስ ይሰጣሉ። የዚህ ሂደት ስኬት በአብዛኛው የተመካው በሪኤጀንቶች ጥራት እና PCR ማሽን ትክክለኛነት ላይ ነው። የሙቀት ዑደቶችን ለማስፈፀም ጥቅም ላይ በሚውለው

ተከታታይ እና አስተማማኝ ውጤቶችን ለማግኘት ለሚፈልግ ማንኛውም ላቦራቶሪ የሙቀት ቁጥጥርን እና የዑደትን አያያዝን መረዳት አስፈላጊ ነው። መሰረታዊ ምርምርን ወይም ከፍተኛ መጠን ያለው ክሊኒካዊ ምርመራዎችን እያደረጉ ከሆነ, የመሳሪያዎች ምርጫ እና የተመቻቹ ፕሮቶኮሎችን ማክበር የስራዎን ትክክለኛነት ይገልፃል. የሞለኪውላር ቤተ-ሙከራን ለማቋቋም በሎጂስቲክስ ጎን ላይ ፍላጎት ላላቸው ፣ የ የዘመናዊ PCR ስርዓቶች ወጪዎች እና ቴክኒካዊ ዝርዝሮች የመመርመሪያ ችሎታዎችዎን ለማራመድ ቀጣዩ ምክንያታዊ እርምጃ ነው።