ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਚੇਨ ਰਿਐਕਸ਼ਨ, ਜਿਸਨੂੰ ਵਿਆਪਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪੀਸੀਆਰ ਵਜੋਂ ਜਾਣਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਅਣੂ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ ਦੇ ਇਤਿਹਾਸ ਵਿੱਚ ਸਭ ਤੋਂ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਤਕਨੀਕੀ ਸਫਲਤਾਵਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਇੱਕ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ। 1980 ਦੇ ਦਹਾਕੇ ਵਿੱਚ ਵਿਕਸਤ, ਇਹ ਤਕਨੀਕ ਇੱਕ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਤੋਂ ਮੈਡੀਕਲ ਡਾਇਗਨੌਸਟਿਕਸ, ਫੋਰੈਂਸਿਕ ਵਿਗਿਆਨ, ਅਤੇ ਜੈਨੇਟਿਕ ਖੋਜ ਵਿੱਚ ਵਰਤੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਇੱਕ ਬੁਨਿਆਦੀ ਸਾਧਨ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲ ਹੋ ਗਈ ਹੈ। ਵਿਗਿਆਨੀਆਂ ਨੂੰ ਡੀਐਨਏ ਦਾ ਇੱਕ ਛੋਟਾ ਜਿਹਾ ਨਮੂਨਾ ਲੈਣ ਅਤੇ ਇਸ ਨੂੰ ਲੱਖਾਂ ਕਾਪੀਆਂ ਵਿੱਚ ਵਧਾਉਣ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦੇ ਕੇ, ਪੀਸੀਆਰ ਨੇ ਜੀਨਾਂ ਦਾ ਵਿਸਥਾਰ ਵਿੱਚ ਅਧਿਐਨ ਕਰਨਾ, ਬਹੁਤ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਨਾਲ ਜਰਾਸੀਮ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣਾ, ਅਤੇ ਜੈਨੇਟਿਕ ਮਾਰਕਰਾਂ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕਰਨਾ ਸੰਭਵ ਬਣਾਇਆ ਹੈ ਜੋ ਪਹਿਲਾਂ ਮਿਆਰੀ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣਾਤਮਕ ਤਰੀਕਿਆਂ ਲਈ ਅਦਿੱਖ ਸਨ।
ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਇੱਕ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਤਕਨੀਕ ਹੈ ਜੋ ਇੱਕ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਪੀਸੀਆਰ ਮਸ਼ੀਨ ਅਤੇ ਇੱਕ ਗਰਮੀ-ਸਥਿਰ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੁਆਰਾ ਸੁਵਿਧਾਜਨਕ, ਤਾਪਮਾਨ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਦੇ ਇੱਕ ਚੱਕਰ ਦੁਆਰਾ ਇੱਕ ਖਾਸ ਡੀਐਨਏ ਹਿੱਸੇ ਦੀਆਂ ਕਈ ਕਾਪੀਆਂ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਵਰਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਡੈਨੇਚਰੇਸ਼ਨ, ਐਨੀਲਿੰਗ ਅਤੇ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ।
ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੀਆਂ ਪੇਚੀਦਗੀਆਂ ਨੂੰ ਸਮਝਣਾ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਦੇ ਪੇਸ਼ੇਵਰਾਂ, ਮੈਡੀਕਲ ਖੋਜਕਰਤਾਵਾਂ, ਅਤੇ ਡਾਇਗਨੌਸਟਿਕ ਉਪਕਰਣਾਂ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਉਦਯੋਗਿਕ ਨਿਰਮਾਤਾਵਾਂ ਲਈ ਜ਼ਰੂਰੀ ਹੈ। ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਤੇਜ਼ ਅਤੇ ਸਹੀ ਅਣੂ ਟੈਸਟਿੰਗ ਦੀ ਮੰਗ ਵਿਸ਼ਵ ਪੱਧਰ 'ਤੇ ਵਧਦੀ ਜਾ ਰਹੀ ਹੈ, ਦੀ ਭਰੋਸੇਯੋਗਤਾ ਪੀਸੀਆਰ ਮਸ਼ੀਨ ਸਫਲ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਦੇ ਨਤੀਜਿਆਂ ਦੀ ਨੀਂਹ ਬਣ ਜਾਂਦੀ ਹੈ। ਇਹ ਲੇਖ ਉੱਚ-ਗੁਣਵੱਤਾ ਵਾਲੇ ਡੀਐਨਏ ਪ੍ਰਸਾਰ ਅਤੇ ਮਜ਼ਬੂਤ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਨਤੀਜਿਆਂ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੇ ਕਦਮਾਂ, ਤਾਪਮਾਨਾਂ ਅਤੇ ਮਕੈਨੀਕਲ ਲੋੜਾਂ ਲਈ ਇੱਕ ਵਿਆਪਕ ਗਾਈਡ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦਾ ਹੈ।
ਲੇਖ ਸੰਖੇਪ ਸਾਰਣੀ
| ਅਨੁਭਾਗ |
ਸੰਖੇਪ |
| ਪੀਸੀਆਰ ਕੀ ਹੈ? |
ਪੀਸੀਆਰ ਇੱਕ ਅਣੂ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ ਤਕਨੀਕ ਹੈ ਜੋ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਡਾਊਨਸਟ੍ਰੀਮ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨਾਂ ਲਈ ਖਾਸ ਡੀਐਨਏ ਕ੍ਰਮਾਂ ਨੂੰ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਵਰਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ। |
| ਪੀਸੀਆਰ ਲਈ ਕੀ ਜ਼ਰੂਰੀ ਹੈ? |
ਸਫਲ ਪੀਸੀਆਰ ਲਈ ਇੱਕ ਟੈਂਪਲੇਟ ਡੀਐਨਏ, ਪ੍ਰਾਈਮਰ, ਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡਸ, ਇੱਕ ਸਥਿਰ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼, ਅਤੇ ਇੱਕ ਉੱਚ-ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਥਰਮਲ ਸਾਈਕਲਰ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। |
| ਪੀਸੀਆਰ ਦੇ 4 ਪੜਾਅ ਕੀ ਹਨ? |
ਇਹ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਹਰ ਚੱਕਰ ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਸਮੱਗਰੀ ਨੂੰ ਦੁੱਗਣਾ ਕਰਨ ਲਈ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀਕਰਣ, ਵਿਨਾਸ਼ਕਾਰੀ, ਐਨੀਲਿੰਗ, ਅਤੇ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਦੇ ਇੱਕ ਤਰਕਸ਼ੀਲ ਕ੍ਰਮ ਦੀ ਪਾਲਣਾ ਕਰਦੀ ਹੈ। |
| ਪੀਸੀਆਰ ਮਸ਼ੀਨ ਦੇ ਕਦਮ ਕੀ ਹਨ? |
ਸਾਜ਼-ਸਾਮਾਨ ਸਹੀ ਤਾਪਮਾਨ ਦੇ ਪਰਿਵਰਤਨ ਨੂੰ ਸਵੈਚਲਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਇਹ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਬਾਇਓਕੈਮੀਕਲ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਸਹੀ ਲੋੜੀਂਦੇ ਅੰਤਰਾਲਾਂ 'ਤੇ ਵਾਪਰਦੀਆਂ ਹਨ। |
| ਡੈਨੇਚਰ ਸਟੈਪ ਲਈ ਤਾਪਮਾਨ ਕੀ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ? |
ਉੱਚ ਤਾਪਮਾਨ, ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 94°C ਅਤੇ 98°C ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ, ਹਾਈਡ੍ਰੋਜਨ ਬਾਂਡ ਨੂੰ ਤੋੜਨ ਅਤੇ ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਵੱਖ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। |
| ਐਨੀਲਿੰਗ ਪੜਾਅ ਦੌਰਾਨ ਕੀ ਹੁੰਦਾ ਹੈ? |
ਇਸ ਪੜਾਅ ਦੇ ਦੌਰਾਨ, ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ ਘਟਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਨੂੰ ਸਿੰਗਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ 'ਤੇ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਤੌਰ 'ਤੇ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਪੂਰਕ ਟੀਚੇ ਦੇ ਕ੍ਰਮਾਂ ਨਾਲ ਜੋੜਿਆ ਜਾ ਸਕੇ। |
| ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਪੜਾਅ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾਣ ਵਾਲਾ ਤਾਪਮਾਨ ਕੀ ਹੈ? |
ਇਹ ਕਦਮ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 72 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ 'ਤੇ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਤਾਕ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਲਈ ਨਵੇਂ ਡੀਐਨਏ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਨੂੰ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਕਰਨ ਲਈ ਅਨੁਕੂਲ ਤਾਪਮਾਨ। |
| ਪੀਸੀਆਰ ਤਾਪਮਾਨ ਦਾ ਪ੍ਰਵਾਹ ਕੀ ਹੈ? |
ਵਹਾਅ ਵਿੱਚ ਉੱਚ, ਨੀਵੇਂ ਅਤੇ ਦਰਮਿਆਨੇ ਤਾਪਮਾਨਾਂ ਦਾ ਇੱਕ ਤੇਜ਼ ਸਾਈਕਲਿੰਗ ਪੈਟਰਨ ਸ਼ਾਮਲ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਜੋ ਲੋੜੀਦੀ ਇਕਾਗਰਤਾ ਤੱਕ ਪਹੁੰਚਣ ਤੱਕ ਦੁਹਰਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। |
ਪੀਸੀਆਰ ਕੀ ਹੈ?
ਪੀਸੀਆਰ, ਜਾਂ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਚੇਨ ਰਿਐਕਸ਼ਨ, ਇੱਕ ਪਰਿਵਰਤਨਸ਼ੀਲ ਅਣੂ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ ਵਿਧੀ ਹੈ ਜੋ ਇੱਕ ਖਾਸ DNA ਨਮੂਨੇ ਦੀਆਂ ਲੱਖਾਂ ਤੋਂ ਅਰਬਾਂ ਕਾਪੀਆਂ ਨੂੰ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਲਈ ਤਿਆਰ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ।
ਇਸਦੇ ਮੂਲ ਰੂਪ ਵਿੱਚ, ਪੀਸੀਆਰ ਇੱਕ 'ਜੀਵ-ਵਿਗਿਆਨਕ ਫੋਟੋਕਾਪੀਰ' ਵਜੋਂ ਕੰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਇਸਦੀ ਖੋਜ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ, ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣਾ ਇੱਕ ਹੌਲੀ ਅਤੇ ਮੁਸ਼ਕਲ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਸੀ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਵਿੱਚ ਕਲੋਨ ਕਰਨਾ ਸ਼ਾਮਲ ਸੀ। ਦੇ ਆਗਮਨ ਨਾਲ ਪੀਸੀਆਰ ਮਸ਼ੀਨ , ਖੋਜਕਰਤਾ ਹੁਣ ਜੀਨੋਮ ਦੇ ਇੱਕ ਖਾਸ ਜੀਨ ਜਾਂ ਹਿੱਸੇ ਨੂੰ ਅਲੱਗ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਕੁਝ ਘੰਟਿਆਂ ਵਿੱਚ ਇਸ ਨੂੰ ਵਧਾ ਸਕਦੇ ਹਨ। ਇਹ ਸਮਰੱਥਾ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ ਕਿਉਂਕਿ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਬਾਇਓਕੈਮੀਕਲ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣਾਂ ਨੂੰ ਮਾਪਣਯੋਗ ਸੰਕੇਤ ਦੇਣ ਲਈ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਮਾਤਰਾ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਕੁਦਰਤੀ ਨਮੂਨੇ ਅਕਸਰ ਸਿਰਫ ਟਰੇਸ ਮਾਤਰਾ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦੇ ਹਨ।
ਇਸ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਦੀ ਬਹੁਪੱਖੀਤਾ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਉਦਯੋਗਾਂ ਵਿੱਚ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨਾਂ ਦੀ ਵਿਭਿੰਨ ਸ਼੍ਰੇਣੀ ਵਿੱਚ ਝਲਕਦੀ ਹੈ। ਕਲੀਨਿਕਲ ਸੈਟਿੰਗਾਂ ਵਿੱਚ, ਇਸਦੀ ਵਰਤੋਂ ਵਾਇਰਲ ਲੋਡਾਂ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ COVID-19 ਜਾਂ HIV ਟੈਸਟਿੰਗ ਵਿੱਚ। ਫੋਰੈਂਸਿਕ ਵਿੱਚ, ਇਹ ਜਾਂਚਕਰਤਾਵਾਂ ਨੂੰ ਜੀਵ-ਵਿਗਿਆਨਕ ਸਮੱਗਰੀ ਦੇ ਸੂਖਮ ਨਮੂਨਿਆਂ ਤੋਂ ਵਿਅਕਤੀਆਂ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕਰਨ ਦੀ ਇਜਾਜ਼ਤ ਦਿੰਦਾ ਹੈ। ਉਦਯੋਗਿਕ ਖੇਤਰ ਵਿੱਚ, ਪੀਸੀਆਰ ਭੋਜਨ ਉਤਪਾਦਾਂ ਦੀ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਅਤੇ ਜੈਨੇਟਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸੋਧੇ ਹੋਏ ਜੀਵਾਂ ਦੀ ਖੋਜ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਨੂੰ ਸਮਝਣਾ ਪੀਸੀਆਰ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਦੇ ਸਿਧਾਂਤ ਅਤੇ ਲਾਗਤਾਂ ਉਹਨਾਂ ਲੈਬਾਂ ਲਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹਨ ਜੋ ਉਹਨਾਂ ਦੀਆਂ ਡਾਇਗਨੌਸਟਿਕ ਸਮਰੱਥਾਵਾਂ ਨੂੰ ਅਪਗ੍ਰੇਡ ਕਰਨਾ ਚਾਹੁੰਦੇ ਹਨ।
ਪੀਸੀਆਰ ਲਈ ਕੀ ਜ਼ਰੂਰੀ ਹੈ?
ਇੱਕ ਸਫਲ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਲਈ ਪੰਜ ਮੁੱਖ ਭਾਗਾਂ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ: ਡੀਐਨਏ ਟੈਂਪਲੇਟ, ਖਾਸ ਪ੍ਰਾਈਮਰ, ਡੀਓਕਸੀਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡ ਟ੍ਰਾਈਫੋਸਫੇਟਸ (ਡੀਐਨਟੀਪੀ), ਇੱਕ ਗਰਮੀ-ਸਥਿਰ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ (ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਟਾਕ), ਅਤੇ ਇੱਕ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਬਫਰ ਹੱਲ।
ਡੀਐਨਏ ਟੈਂਪਲੇਟ ਅਸਲ ਬਲੂਪ੍ਰਿੰਟ ਵਜੋਂ ਕੰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ ਜਿਸਦੀ ਤੁਸੀਂ ਨਕਲ ਕਰਨਾ ਚਾਹੁੰਦੇ ਹੋ। ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਛੋਟੇ, ਸਿੰਥੈਟਿਕ ਟੁਕੜੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਜੋ ਟੀਚੇ ਦੇ ਕ੍ਰਮ ਦੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤ ਅਤੇ ਅੰਤ ਨਾਲ ਮੇਲ ਕਰਨ ਲਈ ਕਸਟਮ-ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਕੀਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ। ਇਹਨਾਂ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ, ਡੀਐਨਏ ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਨੂੰ ਇਹ ਨਹੀਂ ਪਤਾ ਹੋਵੇਗਾ ਕਿ ਨਵੇਂ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਨੂੰ ਬਣਾਉਣਾ ਕਿੱਥੋਂ ਸ਼ੁਰੂ ਕਰਨਾ ਹੈ। dNTPs (A, T, C, ਅਤੇ G) ਕੱਚੇ ਬਿਲਡਿੰਗ ਬਲਾਕ ਹਨ ਜੋ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਨਵੀਂ ਡੀਐਨਏ ਚੇਨ ਨੂੰ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਵਰਤਦਾ ਹੈ।
ਬਰਾਬਰ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਵਾਤਾਵਰਣ ਹੈ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਹੁੰਦੀ ਹੈ. ਬਫਰ ਇੱਕ ਸਥਿਰ ਰਸਾਇਣਕ ਵਾਤਾਵਰਣ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ pH ਅਤੇ ਮੈਗਨੀਸ਼ੀਅਮ ਆਇਨਾਂ ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 'ਤੇ ਧਿਆਨ ਕੇਂਦ੍ਰਤ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਲਈ ਜ਼ਰੂਰੀ ਕੋਫੈਕਟਰ ਹਨ। ਅੰਤ ਵਿੱਚ, ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੇ ਭੌਤਿਕ ਐਗਜ਼ੀਕਿਊਸ਼ਨ ਲਈ ਇੱਕ ਉੱਚ-ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਨ ਵਾਲੇ ਥਰਮਲ ਸਾਈਕਲਰ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਜਿਸਨੂੰ ਅਕਸਰ ਇੱਕ ਪੀਸੀਆਰ ਮਸ਼ੀਨ ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ , ਜੋ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੇ ਹਰੇਕ ਪੜਾਅ ਨੂੰ ਚਾਲੂ ਕਰਨ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦੇ ਤੇਜ਼ ਤਾਪਮਾਨ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਕਰਦੀ ਹੈ।
ਪੀਸੀਆਰ ਮਿਕਸ ਦੇ ਮੁੱਖ ਭਾਗ
ਟੈਂਪਲੇਟ ਡੀਐਨਏ : ਟੀਚਾ ਕ੍ਰਮ ਵਾਲਾ ਨਮੂਨਾ।
ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ : ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਟਾਕ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼, ਜੋ ਉੱਚ ਤਾਪਮਾਨਾਂ 'ਤੇ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਰਹਿੰਦਾ ਹੈ।
ਪ੍ਰਾਈਮਰਜ਼ : ਅੱਗੇ ਅਤੇ ਉਲਟ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਜੋ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਸੀਮਾਵਾਂ ਨੂੰ ਪਰਿਭਾਸ਼ਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ।
dNTPs : ਚਾਰ ਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡ ਬੇਸ ਜੋ ਕਾਪੀਰ ਲਈ 'ਸਿਆਹੀ' ਵਜੋਂ ਕੰਮ ਕਰਦੇ ਹਨ।
ਬਫਰ ਅਤੇ ਆਇਨ : ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਅਤੇ ਸਥਿਰਤਾ ਨੂੰ ਬਰਕਰਾਰ ਰੱਖਦਾ ਹੈ।
ਪੀਸੀਆਰ ਦੇ 4 ਪੜਾਅ ਕੀ ਹਨ?
ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਚਾਰ ਪ੍ਰਾਇਮਰੀ ਫੰਕਸ਼ਨਲ ਪੜਾਅ ਸ਼ਾਮਲ ਹੁੰਦੇ ਹਨ: ਸ਼ੁਰੂਆਤੀਕਰਣ, ਡੈਨੇਚਰੇਸ਼ਨ, ਐਨੀਲਿੰਗ, ਅਤੇ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ (ਇਲੋਂਗੇਸ਼ਨ ਵੀ ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ)।
ਪਹਿਲਾ ਪੜਾਅ, ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ, ਇੱਕ ਵਾਰ ਦੀ ਘਟਨਾ ਹੈ ਜਿੱਥੇ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਚੈਂਬਰ ਨੂੰ ਉੱਚ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਗਰਮ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ ਇਹ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਇਆ ਜਾ ਸਕੇ ਕਿ ਡੀਐਨਏ ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਸਰਗਰਮ ਹੈ ਅਤੇ ਕੋਈ ਵੀ ਗੰਦਗੀ ਨੂੰ ਬੇਅਸਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਡੈਨੇਚਰੇਸ਼ਨ ਦਾ ਚੱਕਰ ਸ਼ੁਰੂ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਜਿੱਥੇ ਡਬਲ-ਸਟੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਵੱਖ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਐਨੀਲਿੰਗ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਜਿੱਥੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਆਪਣੇ ਟੀਚੇ ਲੱਭਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਅੰਤ ਵਿੱਚ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ, ਜਿੱਥੇ ਨਵੇਂ ਡੀਐਨਏ ਦਾ ਸੰਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਤਿੰਨ-ਪੜਾਅ ਵਾਲਾ ਚੱਕਰ (ਡੀਨੇਚਰੇਸ਼ਨ, ਐਨੀਲਿੰਗ, ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ) 25 ਤੋਂ 40 ਵਾਰ ਦੁਹਰਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
ਕਿਉਂਕਿ ਹਰ ਸਫਲ ਚੱਕਰ ਦੇ ਨਾਲ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਦੁੱਗਣੀ ਹੋ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਵਾਧਾ ਘਾਤਕ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ, 30 ਚੱਕਰਾਂ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਇੱਕ ਅਣੂ ਨੂੰ ਇੱਕ ਅਰਬ ਤੋਂ ਵੱਧ ਕਾਪੀਆਂ ਵਿੱਚ ਬਦਲਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਹੈ ਜੋ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ ਆਧੁਨਿਕ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਥਰਮਲ ਸਾਈਕਲਰ ਆਧੁਨਿਕ ਵਿਗਿਆਨ ਲਈ ਬਹੁਤ ਜ਼ਰੂਰੀ ਹਨ। ਉੱਚ-ਗੁਣਵੱਤਾ ਵਾਲੀ ਵਿੱਚ ਪਾਏ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਹਾਈ-ਸਪੀਡ ਹੀਟਿੰਗ ਅਤੇ ਕੂਲਿੰਗ ਬਲਾਕਾਂ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ PCR ਮਸ਼ੀਨ , ਉੱਚ-ਥਰੂਪੁੱਟ ਡਾਇਗਨੌਸਟਿਕ ਵਾਤਾਵਰਨ ਵਿੱਚ ਅਮਲੀ ਵਰਤੋਂ ਲਈ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਬਹੁਤ ਹੌਲੀ ਹੋਵੇਗੀ।
ਪੀਸੀਆਰ ਮਸ਼ੀਨ ਦੇ ਕਦਮ ਕੀ ਹਨ?
ਪੀਸੀਆਰ ਮਸ਼ੀਨ ਦੇ ਕਦਮਾਂ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਥਰਮਲ ਬਲਾਕ ਦੇ ਸਟੀਕ ਇਲੈਕਟ੍ਰਾਨਿਕ ਨਿਯੰਤਰਣ ਦੁਆਰਾ ਤਾਪਮਾਨ ਦੀ ਸਵੈਚਲਿਤ ਸਾਈਕਲਿੰਗ, ਰੈਂਪ ਰੇਟ, ਹੋਲਡ ਟਾਈਮ, ਅਤੇ ਅੰਤਮ ਕੂਲਿੰਗ ਦਾ ਪ੍ਰਬੰਧਨ ਸ਼ਾਮਲ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।
ਇੱਕ ਪੀਸੀਆਰ ਮਸ਼ੀਨ ਇੱਕ ਧਾਤ ਦੇ ਬਲਾਕ ਨੂੰ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਗਰਮ ਕਰਨ ਅਤੇ ਠੰਡਾ ਕਰਨ ਲਈ ਪੈਲਟੀਅਰ ਤੱਤਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੰਮ ਕਰਦੀ ਹੈ ਜੋ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਟਿਊਬਾਂ ਨੂੰ ਰੱਖਦਾ ਹੈ। ਮਸ਼ੀਨ ਦੇ ਦ੍ਰਿਸ਼ਟੀਕੋਣ ਤੋਂ 'ਕਦਮਾਂ' ਵਿੱਚ 'ਰੈਂਪ' ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਤਾਪਮਾਨਾਂ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲੀ ਦੀ ਗਤੀ ਹੈ, ਅਤੇ 'ਹੋਲਡ', ਜੋ ਕਿ ਮਸ਼ੀਨ ਦੁਆਰਾ ਇੱਕ ਖਾਸ ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ ਕਾਇਮ ਰੱਖਣ ਦੀ ਮਿਆਦ ਹੈ। ਹਾਈ-ਐਂਡ ਮਸ਼ੀਨਾਂ ਨੂੰ ਪਰਿਵਰਤਨ ਵਿੱਚ ਬਿਤਾਏ ਗਏ ਸਮੇਂ ਨੂੰ ਘੱਟ ਕਰਨ ਲਈ ਬਹੁਤ ਤੇਜ਼ ਰੈਂਪ ਦਰਾਂ ਲਈ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ, ਜੋ ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਬਾਈਡਿੰਗ ਜਾਂ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਡਿਗਰੇਡੇਸ਼ਨ ਦੇ ਜੋਖਮ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦਾ ਹੈ।
ਮਸ਼ੀਨ ਦੇ ਅੰਦਰ ਸਾਫਟਵੇਅਰ ਉਪਭੋਗਤਾਵਾਂ ਨੂੰ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮ ਕਰਨ ਦੀ ਇਜਾਜ਼ਤ ਦਿੰਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਵਿੱਚ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਹੀਟ-ਅੱਪ, ਤਿੰਨ ਮੁੱਖ ਪੜਾਵਾਂ ਦੇ ਦੁਹਰਾਉਣ ਵਾਲੇ ਲੂਪਸ, ਅਤੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ ਉਦੋਂ ਤੱਕ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਰੱਖਣ ਲਈ ਇੱਕ ਠੰਡੇ ਤਾਪਮਾਨ (ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 4 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ) 'ਤੇ ਇੱਕ ਅੰਤਮ ਹੋਲਡ ਸਟੈਪ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ ਜਦੋਂ ਤੱਕ ਟੈਕਨੀਸ਼ੀਅਨ ਉਨ੍ਹਾਂ ਨੂੰ ਮੁੜ ਪ੍ਰਾਪਤ ਨਹੀਂ ਕਰ ਸਕਦਾ। 'ਤੇ ਆਧੁਨਿਕ ਡਿਜੀਟਲ ਇੰਟਰਫੇਸ ਪੀਸੀਆਰ ਮਸ਼ੀਨ ਵੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੀ ਅਸਲ-ਸਮੇਂ ਦੀ ਨਿਗਰਾਨੀ ਕਰਨ ਦੀ ਇਜਾਜ਼ਤ ਦਿੰਦੇ ਹਨ, ਇਹ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ ਥਰਮਲ ਪ੍ਰੋਫਾਈਲ ਦੀ ਪਾਲਣਾ ਕੀਤੀ ਜਾ ਰਹੀ ਹੈ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਵੱਧ ਤੋਂ ਵੱਧ ਪ੍ਰਜਨਨਯੋਗਤਾ ਲਈ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ।
ਡੈਨੇਚਰ ਸਟੈਪ ਲਈ ਤਾਪਮਾਨ ਕੀ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ?
ਡੀਐਨਏ ਸਟ੍ਰੈਂਡਾਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਹਾਈਡ੍ਰੋਜਨ ਬਾਂਡਾਂ ਨੂੰ ਤੋੜਨ ਦੀ ਸਹੂਲਤ ਲਈ ਡੀਨੈਚੁਰੇਸ਼ਨ ਸਟੈਪ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 94°C ਅਤੇ 98°C ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਤਾਪਮਾਨ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ।
ਇਸ ਅਤਿਅੰਤ ਗਰਮੀ ਤੇ, ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਡਬਲ-ਹੇਲਿਕਸ ਬਣਤਰ ਅਸਥਿਰ ਹੋ ਜਾਂਦੀ ਹੈ। ਹਾਈਡ੍ਰੋਜਨ ਬਾਂਡ ਜੋ ਐਡੀਨਾਈਨ-ਥਾਈਮਾਈਨ ਅਤੇ ਸਾਈਟੋਸਾਈਨ-ਗੁਆਨੀਨ ਜੋੜਿਆਂ ਨੂੰ ਇਕੱਠੇ ਰੱਖਦੇ ਹਨ, ਪਿਘਲ ਜਾਂਦੇ ਹਨ, ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਦੋ ਸੁਤੰਤਰ ਸਿੰਗਲ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਹੁੰਦੇ ਹਨ। ਇਹ ਅਗਲੇ ਕਦਮਾਂ ਲਈ ਇੱਕ ਨਾਜ਼ੁਕ ਪੂਰਵ ਸ਼ਰਤ ਹੈ, ਕਿਉਂਕਿ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਅਤੇ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਸਿਰਫ਼ ਸਿੰਗਲ-ਸਟੈਂਡਡ ਟੈਂਪਲੇਟਾਂ ਨਾਲ ਇੰਟਰੈਕਟ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ। ਜੇ ਤਾਪਮਾਨ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਹੈ, ਤਾਂ ਡੀਐਨਏ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਵੱਖ ਨਹੀਂ ਹੋਵੇਗਾ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਅਸਫਲ ਜਾਂ ਅਕੁਸ਼ਲ ਪ੍ਰਸਾਰਣ ਹੋ ਜਾਵੇਗਾ।
ਹਾਲਾਂਕਿ, ਇਸ ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ ਕਾਇਮ ਰੱਖਣ ਲਈ ਇੱਕ ਬਹੁਤ ਹੀ ਮਜ਼ਬੂਤ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। ਇਹੀ ਕਾਰਨ ਹੈ ਕਿ ਤਾਕ ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੀ ਖੋਜ, ਜੋ ਕਿ ਤਾਪ ਨੂੰ ਪਿਆਰ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਥਰਮਸ ਐਕਵਾਟਿਕਸ ਤੋਂ ਅਲੱਗ ਹੈ , ਬਹੁਤ ਕ੍ਰਾਂਤੀਕਾਰੀ ਸੀ। ਮਿਆਰੀ ਐਨਜ਼ਾਈਮ 95°C 'ਤੇ ਨਸ਼ਟ ਹੋ ਜਾਣਗੇ, ਪਰ Taq ਕਾਰਜਸ਼ੀਲ ਰਹਿੰਦਾ ਹੈ। ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾਵਾਂ ਨੂੰ ਇਹ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਕਿ ਉਹਨਾਂ ਦੀ ਪੀਸੀਆਰ ਮਸ਼ੀਨ ਸਾਰੇ ਖੂਹਾਂ ਵਿੱਚ ਇੱਕਸਾਰ ਹੀਟਿੰਗ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦੀ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ 'ਠੰਡੇ ਧੱਬਿਆਂ' ਨੂੰ ਰੋਕਿਆ ਜਾ ਸਕੇ ਜਿੱਥੇ ਵਿਨਾਸ਼ਕਾਰੀ ਫੇਲ੍ਹ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਇੱਕ ਮੁੱਖ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਹੈ। ਉੱਚ-ਗੁਣਵੱਤਾ ਦੇ ਅਣੂ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ ਉਪਕਰਨ.
ਪੀਸੀਆਰ ਦੇ ਐਨੀਲਿੰਗ ਪੜਾਅ ਦੌਰਾਨ ਕੀ ਹੁੰਦਾ ਹੈ?
ਐਨੀਲਿੰਗ ਪੜਾਅ ਦੇ ਦੌਰਾਨ, ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ 50°C ਅਤੇ 65°C ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਘਟਾ ਦਿੱਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ DNA ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਸਿੰਗਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ DNA ਟੈਂਪਲੇਟਾਂ 'ਤੇ ਆਪਣੇ ਪੂਰਕ ਕ੍ਰਮਾਂ ਨਾਲ ਬੰਨ੍ਹ ਸਕਦੇ ਹਨ।
ਇਹ ਕਦਮ ਦਲੀਲ ਨਾਲ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦਾ ਸਭ ਤੋਂ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਹਿੱਸਾ ਹੈ। ਵਰਤਿਆ ਜਾਣ ਵਾਲਾ ਖਾਸ ਤਾਪਮਾਨ ਵਰਤੇ ਜਾ ਰਹੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੇ ਪਿਘਲਣ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ (Tm) 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਜੇਕਰ ਤਾਪਮਾਨ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਟੈਂਪਲੇਟ ਨਾਲ ਨਹੀਂ ਬੰਨ੍ਹਣਗੇ। ਜੇਕਰ ਇਹ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਹੈ, ਤਾਂ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਉਹਨਾਂ ਕ੍ਰਮਾਂ ਨਾਲ ਬੰਨ੍ਹ ਸਕਦੇ ਹਨ ਜੋ ਸਿਰਫ 'ਅੰਸ਼ਕ ਤੌਰ 'ਤੇ' ਸਮਾਨ ਹਨ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਅਤੇ ਗੜਬੜ ਵਾਲੇ ਨਤੀਜੇ ਨਿਕਲਦੇ ਹਨ। ਪੀਸੀਆਰ ਮਸ਼ੀਨ ਉੱਚ ਪੱਧਰੀ ਸ਼ੁੱਧਤਾ (ਅਕਸਰ 0.1 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਦੇ ਅੰਦਰ) ਨਾਲ ਇਸ ਟੀਚੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ ਹਿੱਟ ਕਰਨ ਦੇ ਯੋਗ ਹੋਣੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ।
ਐਨੀਲਿੰਗ ਪੜਾਅ ਦੀ ਮਿਆਦ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 20 ਤੋਂ 40 ਸਕਿੰਟ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। ਇਸ ਸੰਖੇਪ ਵਿੰਡੋ ਦੇ ਦੌਰਾਨ, ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਮਿਸ਼ਰਣ ਨੂੰ ਅਣੂ ਮੋਸ਼ਨ ਦੁਆਰਾ ਨੈਵੀਗੇਟ ਕਰਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਸਾਈਟ 'ਤੇ ਸਨੈਪ ਕਰਦੇ ਹਨ। ਇੱਕ ਵਾਰ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਐਨੀਲ ਹੋ ਜਾਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਉਹ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਨੂੰ ਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡਸ ਜੋੜਨਾ ਸ਼ੁਰੂ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਬਿੰਦੂ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦੇ ਹਨ। ਇਹ ਸਟੀਕ ਤਾਲਮੇਲ ਉਹ ਹੈ ਜੋ ਇੱਕ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਜੀਵ-ਵਿਗਿਆਨਕ ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ ਖਾਸ ਜੈਨੇਟਿਕ ਪਰਿਵਰਤਨ ਜਾਂ ਜਰਾਸੀਮ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਪੇਸ਼ੇਵਰ ਡਾਇਗਨੌਸਟਿਕ ਮਸ਼ੀਨਾਂ ਵਿੱਚ ਨਿਵੇਸ਼ ਕਲੀਨਿਕਲ ਲੈਬਾਂ ਲਈ ਇੱਕ ਤਰਜੀਹ ਹੈ।
ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਪੜਾਅ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾਣ ਵਾਲਾ ਤਾਪਮਾਨ ਕੀ ਹੈ?
ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਸਟੈਪ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 72°C 'ਤੇ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਨਵੇਂ DNA ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਨੂੰ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਕਰਨ ਲਈ ਤਾਪ-ਸਥਿਰ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਲਈ ਸਰਵੋਤਮ ਕਾਰਜਸ਼ੀਲ ਤਾਪਮਾਨ ਹੈ।
72°C 'ਤੇ, DNA ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਆਪਣੀ ਸਿਖਰ ਕੁਸ਼ਲਤਾ 'ਤੇ ਹੈ। ਇਹ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਸਾਈਟ ਤੋਂ ਸ਼ੁਰੂ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਟੈਂਪਲੇਟ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਦੇ ਨਾਲ ਅੱਗੇ ਵਧਦੇ ਹੋਏ, ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੇ 3' ਸਿਰੇ ਵਿੱਚ dNTPs ਜੋੜਨਾ ਸ਼ੁਰੂ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਟੈਂਪਲੇਟ ਨੂੰ 'ਪੜ੍ਹਦਾ ਹੈ' ਅਤੇ ਨਵੇਂ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਵਿੱਚ ਪੂਰਕ ਅਧਾਰ ਰੱਖਦਾ ਹੈ। ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ, ਜੇਕਰ ਟੈਂਪਲੇਟ ਵਿੱਚ ਐਡੀਨਾਈਨ ਹੈ, ਤਾਂ ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਇੱਕ ਥਾਈਮਿਨ ਜੋੜਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੀ ਗਤੀ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਹੈ; ਟਾਕ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਪ੍ਰਤੀ ਮਿੰਟ ਲਗਭਗ 1,000 ਬੇਸ ਜੋੜੇ ਜੋੜ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਇਸ ਪੜਾਅ ਲਈ ਸਮੇਂ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਕਾਪੀ ਕੀਤੇ ਜਾ ਰਹੇ ਡੀਐਨਏ ਹਿੱਸੇ ਦੀ ਲੰਬਾਈ 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦੀ ਹੈ। ਜੇਕਰ ਟੀਚਾ ਕ੍ਰਮ 1,000 ਬੇਸ ਜੋੜਿਆਂ ਲੰਬਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਪੜਾਅ ਇੱਕ ਮਿੰਟ ਲਈ ਸੈੱਟ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਜੇਕਰ ਟੀਚਾ ਛੋਟਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਸਮੁੱਚੀ ਪ੍ਰੋਸੈਸਿੰਗ ਸਮੇਂ ਨੂੰ ਬਚਾਉਣ ਲਈ ਸਮਾਂ ਘਟਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣਾ ਕਿ ਪੀਸੀਆਰ ਮਸ਼ੀਨ ਪੂਰੀ-ਲੰਬਾਈ ਵਾਲੇ ਡੀਐਨਏ ਸਟ੍ਰੈਂਡਾਂ ਨੂੰ ਪੂਰਾ ਕਰਨ ਲਈ ਇਸ ਪੜਾਅ ਦੌਰਾਨ ਸਥਿਰ 72°C ਬਰਕਰਾਰ ਰੱਖਦੀ ਹੈ।
ਪੀਸੀਆਰ ਤਾਪਮਾਨ ਦਾ ਪ੍ਰਵਾਹ ਕੀ ਹੈ?
ਪੀਸੀਆਰ ਤਾਪਮਾਨ ਦਾ ਪ੍ਰਵਾਹ ਉੱਚ-ਤਾਪ ਵਿਨਾਸ਼ਕਾਰੀ, ਘੱਟ-ਹੀਟ ਐਨੀਲਿੰਗ, ਅਤੇ ਮੱਧਮ-ਹੀਟ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਦੇ ਦੁਹਰਾਉਣ ਵਾਲੇ ਚੱਕਰ ਦੀ ਪਾਲਣਾ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਇੱਕ 'ਸਾਵਟੁੱਥ' ਥਰਮਲ ਪ੍ਰੋਫਾਈਲ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ।
ਇਹ ਪ੍ਰਵਾਹ ਡੀਐਨਏ ਮਾਤਰਾ ਦੀ ਜਿਓਮੈਟ੍ਰਿਕ ਤਰੱਕੀ ਨੂੰ ਵੱਧ ਤੋਂ ਵੱਧ ਕਰਨ ਲਈ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ। ਇੱਕ ਆਮ ਦੌੜ ਵਿੱਚ, ਮਸ਼ੀਨ 2 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ 95°C 'ਤੇ ਸ਼ੁਰੂ ਹੁੰਦੀ ਹੈ (ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਵਿਨਾਸ਼ਕਾਰੀ), ਫਿਰ ਇੱਕ ਲੂਪ ਵਿੱਚ ਦਾਖਲ ਹੁੰਦੀ ਹੈ: 30 ਸਕਿੰਟਾਂ ਲਈ 95°C, 30 ਸਕਿੰਟਾਂ ਲਈ 55°C, ਅਤੇ 60 ਸਕਿੰਟਾਂ ਲਈ 72°C। ਇਹ ਲੂਪ 30 ਵਾਰ ਦੁਹਰਾਉਂਦਾ ਹੈ. ਅੰਤ ਵਿੱਚ, 5-10 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ 72°C 'ਤੇ ਇੱਕ 'ਅੰਤਿਮ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ' ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ ਇਹ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਇਆ ਜਾ ਸਕੇ ਕਿ ਸਾਰੇ ਸਿੰਗਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ ਸਟੋਰੇਜ ਲਈ 4°C ਤੱਕ ਠੰਢੇ ਹੋਣ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਡਬਲ-ਸਟੈਂਡਡ ਹਨ।
ਇਸ ਤਾਪਮਾਨ ਦੇ ਵਹਾਅ ਦੀ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਪੀਸੀਆਰ ਉਤਪਾਦ ਦੀ ਉਪਜ ਅਤੇ ਸ਼ੁੱਧਤਾ 'ਤੇ ਸਿੱਧਾ ਅਸਰ ਪਾਉਂਦੀ ਹੈ। ਜੇਕਰ ਵਹਾਅ ਅਸੰਗਤ ਹੈ, ਤਾਂ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਗਤੀਵਿਧੀ ਗੁਆ ਸਕਦਾ ਹੈ ਜਾਂ ਪ੍ਰਾਈਮਰ 'ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡਾਈਮਰ' ਬਣ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਜੋ ਕਿ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੀਆਂ ਬੇਕਾਰ ਕਲਾਕ੍ਰਿਤੀਆਂ ਹਨ। ਇਸਦੇ ਕਾਰਨ, ਪੀਸੀਆਰ ਮਸ਼ੀਨ ਦੀ ਕੈਲੀਬ੍ਰੇਸ਼ਨ ਅਤੇ ਥਰਮਲ ਇਕਸਾਰਤਾ ਅਣੂ ਨਿਦਾਨ ਜਾਂ ਖੋਜ ਕਰਨ ਵਾਲੀ ਕਿਸੇ ਵੀ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਲਈ ਸਭ ਤੋਂ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਕਾਰਕ ਹਨ।
ਤਾਪਮਾਨ ਦੇ ਵਹਾਅ ਦੀ ਸੰਖੇਪ ਸਾਰਣੀ
| ਪੜਾਅ |
ਆਮ ਤਾਪਮਾਨ |
ਮਕਸਦ |
| ਸ਼ੁਰੂਆਤ |
94°C - 96°C |
ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦਾ ਹੈ. |
| ਵਿਕਾਰ |
94°C - 98°C |
ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਸਿੰਗਲ ਸਟ੍ਰੈਂਡਾਂ ਵਿੱਚ ਵੱਖ ਕਰਦਾ ਹੈ। |
| ਐਨੀਲਿੰਗ |
50°C - 65°C |
ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਨੂੰ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਕ੍ਰਮਾਂ ਨਾਲ ਜੋੜਨ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦਾ ਹੈ। |
| ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ |
72°C |
ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਨਵੇਂ ਡੀਐਨਏ ਸਟ੍ਰੈਂਡਾਂ ਦਾ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਕਰਦਾ ਹੈ। |
| ਫਾਈਨਲ ਹੋਲਡ |
4°C - 10°C |
ਵਧੇ ਹੋਏ ਉਤਪਾਦ ਦੀ ਥੋੜ੍ਹੇ ਸਮੇਂ ਦੀ ਸਟੋਰੇਜ। |
ਸਿੱਟਾ
ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਚੇਨ ਰਿਐਕਸ਼ਨ ਇੱਕ ਸ਼ਾਨਦਾਰ ਅਤੇ ਸ਼ਕਤੀਸ਼ਾਲੀ ਸਾਧਨ ਹੈ ਜਿਸ ਨੇ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ ਦੇ ਲੈਂਡਸਕੇਪ ਵਿੱਚ ਕ੍ਰਾਂਤੀ ਲਿਆ ਦਿੱਤੀ ਹੈ। ਵਿਨਾਸ਼ਕਾਰੀ, ਐਨੀਲਿੰਗ ਅਤੇ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਦੇ ਸੂਝਵਾਨ ਕਦਮਾਂ ਦੀ ਪਾਲਣਾ ਕਰਕੇ, ਵਿਗਿਆਨੀ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਅੰਦਰ ਰੱਖੇ ਰਾਜ਼ਾਂ ਨੂੰ ਖੋਲ੍ਹ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਮੈਡੀਕਲ ਅਤੇ ਫੋਰੈਂਸਿਕ ਸਵਾਲਾਂ ਦੇ ਜਵਾਬ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ। ਇਸ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੀ ਸਫਲਤਾ ਰੀਐਜੈਂਟਸ ਦੀ ਗੁਣਵੱਤਾ ਅਤੇ ਪੀਸੀਆਰ ਮਸ਼ੀਨ ਦੀ ਸ਼ੁੱਧਤਾ 'ਤੇ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦੀ ਹੈ। ਥਰਮਲ ਚੱਕਰਾਂ ਨੂੰ ਚਲਾਉਣ ਲਈ ਵਰਤੀ ਜਾਂਦੀ
ਇਕਸਾਰ ਅਤੇ ਭਰੋਸੇਮੰਦ ਨਤੀਜੇ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਦੀ ਕੋਸ਼ਿਸ਼ ਕਰਨ ਵਾਲੀ ਕਿਸੇ ਵੀ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਲਈ, ਤਾਪਮਾਨ ਨਿਯੰਤਰਣ ਅਤੇ ਚੱਕਰ ਪ੍ਰਬੰਧਨ ਦੀਆਂ ਬਾਰੀਕੀਆਂ ਨੂੰ ਸਮਝਣਾ ਜ਼ਰੂਰੀ ਹੈ। ਭਾਵੇਂ ਤੁਸੀਂ ਮੁਢਲੀ ਖੋਜ ਕਰ ਰਹੇ ਹੋ ਜਾਂ ਉੱਚ-ਆਵਾਜ਼ ਵਾਲੇ ਕਲੀਨਿਕਲ ਡਾਇਗਨੌਸਟਿਕਸ, ਸਾਜ਼ੋ-ਸਾਮਾਨ ਦੀ ਚੋਣ ਅਤੇ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ ਦੀ ਪਾਲਣਾ ਤੁਹਾਡੇ ਕੰਮ ਦੀ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਨੂੰ ਪਰਿਭਾਸ਼ਿਤ ਕਰੇਗੀ। ਇੱਕ ਅਣੂ ਲੈਬ ਸਥਾਪਤ ਕਰਨ ਦੇ ਲੌਜਿਸਟਿਕਲ ਪੱਖ ਵਿੱਚ ਦਿਲਚਸਪੀ ਰੱਖਣ ਵਾਲਿਆਂ ਲਈ, ਖੋਜ ਕਰਨ ਲਈ ਆਧੁਨਿਕ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ ਦੀਆਂ ਲਾਗਤਾਂ ਅਤੇ ਤਕਨੀਕੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਤੁਹਾਡੀਆਂ ਡਾਇਗਨੌਸਟਿਕ ਸਮਰੱਥਾਵਾਂ ਨੂੰ ਅੱਗੇ ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਅਗਲਾ ਤਰਕਪੂਰਨ ਕਦਮ ਹੈ।
